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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化时平板涂布后要放多久?
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夜龙舞

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-19 16:05:38
转化后不长菌的主要原因是质粒没有进去，而不是放多久的问题。首先看你的质粒的特性，是不是温控质粒，或者其他营养要求的质粒，再就是热激的温度和时间一定要准确，培养基预热等等，转化也是有概率的，多做几次。
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11楼2010-08-19 13:16:17
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
嗯,非常感谢各位虫友!
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12楼2010-08-19 15:00:04
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banhf

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要看你连接的片段多大，是否超出载体的容量，如果没有的话就要考虑优化连接体系，一般体系中外源片段的量是载体量的3-4倍
还有一个问题就是感受态，要考虑感受态的效率问题
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13楼2010-08-19 17:17:44
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保护你的大树

新虫 (小有名气)
我是新手，但是我们实验室的标准是50到100UL，一般就是50，慢慢的涂抹，知道你感觉有一点点阻力为止。
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14楼2010-08-23 09:58:51
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)
感谢各位虫友！PCR产物经过酶切后与同样经过酶切的质粒连接，为什么一直没能转化成功？是不是PCR的酶切的浓度太低，还是其他原因？
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15楼2010-08-24 17:30:35
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195251071

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好再涂平板前离心，移走上清，剩余体积为50到100微升的时候涂布比较好，这样放置5分钟就可以了。不长的原因很多啊，你转得是连接产物，那就检查抗性是不是涂错了，如果抗性没有问题，那就可能是你的连接这个环节有问题。
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16楼2010-08-25 09:33:05
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airzzy

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
放在超净台里吹，至少不能倒置的时候留下来
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17楼2010-08-31 18:31:33
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xjzw

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是最好涂干了，不能水汽太大；还有涂布棒要提前烧好凉着，否则会烫死细菌；感受态细胞在加入载体到冰浴的过程中不要在室温放置过久，加入质粒后就去冰浴，加质粒时不用等感受态细胞完全融化，稍微看到有的融化就可以加质粒了，然后去冰浴，自然会融化，在冰浴过程中，间或地摇动，让质粒充分混匀，到热激时就不能摇动，希望对你有帮助。
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18楼2012-12-08 19:22:28
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