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夜龙舞

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励 2010-08-19 16:05:38
转化后不长菌的主要原因是质粒没有进去,而不是放多久的问题。首先看你的质粒的特性,是不是温控质粒,或者其他营养要求的质粒,再就是热激的温度和时间一定要准确,培养基预热等等,转化也是有概率的,多做几次。
11楼2010-08-19 13:16:17
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)

嗯,非常感谢各位虫友!
12楼2010-08-19 15:00:04
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banhf

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要看你连接的片段多大,是否超出载体的容量,如果没有的话就要考虑优化连接体系,一般体系中外源片段的量是载体量的3-4倍
还有一个问题就是感受态,要考虑感受态的效率问题
13楼2010-08-19 17:17:44
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保护你的大树

新虫 (小有名气)

我是新手,但是我们实验室的标准是50到100UL,一般就是50,慢慢的涂抹,知道你感觉有一点点阻力为止。
14楼2010-08-23 09:58:51
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oyanxuelai

银虫 (小有名气)

感谢各位虫友!PCR产物经过酶切后与同样经过酶切的质粒连接,为什么一直没能转化成功?是不是PCR的酶切的浓度太低,还是其他原因?
15楼2010-08-24 17:30:35
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195251071

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最好再涂平板前离心,移走上清,剩余体积为50到100微升的时候涂布比较好,这样放置5分钟就可以了。不长的原因很多啊,你转得是连接产物,那就检查抗性是不是涂错了,如果抗性没有问题,那就可能是你的连接这个环节有问题。
16楼2010-08-25 09:33:05
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airzzy

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
放在超净台里吹,至少不能倒置的时候留下来
17楼2010-08-31 18:31:33
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xjzw

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
是最好涂干了,不能水汽太大;还有涂布棒要提前烧好凉着,否则会烫死细菌;感受态细胞在加入载体到冰浴的过程中不要在室温放置过久,加入质粒后就去冰浴,加质粒时不用等感受态细胞完全融化,稍微看到有的融化就可以加质粒了,然后去冰浴,自然会融化,在冰浴过程中,间或地摇动,让质粒充分混匀,到热激时就不能摇动,希望对你有帮助。
18楼2012-12-08 19:22:28
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