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zmj521good

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 为什么没有转化成功的菌依然可以在Amp+培养基上长呢?到底为什么呢? 已有10人参与

我将连接好的T载体转化感受态DH5α,之后用载体上的通用引物扩增,总是无带,后来提取质粒,发现竟没有质粒,所以说明转化失败,但是转化失败菌为什么可以在含有抗生素的培养基上长呢?在这里请教各位高手了!!!
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认真是一种习惯
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米兰红黑魂

木虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试问楼主培养皿上的菌是成单个菌落的吗?如果全部长满,几乎平铺了涂布到的地方,说明是amp失效啦!如果是单个菌落的话,那原因还需要另外找了。
人生如棋,我愿为卒,即便走的在慢,在艰难,你何曾看见我后退一步!!!
3楼2012-09-04 22:23:56
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apple712

银虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
会不会是amp失效了呢?
2楼2012-09-04 21:56:53
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irenescbg

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-09-05 14:13:16
通常有两种可能,一种是Amp失效,如上所说,另外一种也比较常见,就是感受态细胞污染。我们实验室最近就是这样的,明明挑单克隆做感受态,谁知道居然就有Amp抗性菌的污染,直接把没转化的感受态细胞涂在Amp板子上一样长。后来跟师兄师姐们请教,原来是正常现象,大家都遇到过。避免的方法就是保存好你的Dh5a的菌种,不要从感受态划板子再做感受态。如果是Amp失效,换新的Amp,或者从其他实验室借一个板子试试。有的时候Amp容易失效,摇菌时间过长也会导致提不出质粒。如果是感受态污染,就重新做吧
请赐予我正能量吧!加油!
4楼2012-09-05 09:22:38
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youyuxing

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
irenescbg说的真详细  又长进不小
5楼2012-09-05 12:27:03
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