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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 农杆菌介导转化技术
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)

[求助] 农杆菌介导转化技术 已有2人参与

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各位师兄师姐，小弟最近正在做农杆菌侵染实验，但共培养后的外植体用无菌蒸馏水清洗后总是返菌，抗生素已经加到最大了，求助各位高手，为我指点迷津，顺便问一句，各位清洗共培养后的外植体只用无菌蒸馏水吗？谢谢各位。
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岂能尽如人意，但求无愧我心。
1楼 2013-04-19 23:47:50
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hnndljd

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-21 01:01:00
我们这里是的
无菌水洗三次
转到含抗生素的培养基上
培养基里的抗生素是过滤灭菌的
然后在培养基高温灭菌之后，放置到40度左右（摸起来不烫手）再加进去
然后倒平板的

外植体本身不带菌吧？返菌返的是不是杂菌啊，如果是大田采样要注意这个。
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十年树木，百年树人
2楼2013-04-20 01:33:08
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)
外植体不带落，返的菌应该是农杆菌，也不知该怎么办才好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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岂能尽如人意，但求无愧我心。
3楼2013-04-21 00:30:30
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寒冰利剑

金虫 (小有名气)
外植体不带菌。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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岂能尽如人意，但求无愧我心。
4楼2013-04-21 00:40:14
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wxf8470

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
缩短浸染时间，再用带抗生素的液体培养基多洗一次。
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5楼2013-04-21 07:04:50
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hnndljd

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-22 17:03:33
抗生素没加错吧
对农杆菌应该是Cefotamin吧
我们用的是Kana+Cefo的培养基
在没有抗生素的培养基上共培养48小时后
洗净转到含抗生素的培养基上
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十年树木，百年树人
6楼2013-04-21 21:45:49
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把你做的具体步骤发过来看看，详细点比较好。看看怎么回事。
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7楼2013-04-22 11:11:14
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-22 17:03:46
这种情况碰到的还是蛮多的，很多人最后不得不换菌株。我个人认为是耐药性导致的。所以你可以试试非抗生素类的杀菌剂啊。比如：Genloci的农杆菌清除试剂盒（G&C kit）
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8楼2013-04-22 16:02:15
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loveerobin

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

尽量在未形成规模的时候洗，洗完了一般救不回来了
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9楼2013-07-02 10:58:44
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snhajn

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

共培养两天是摸索出来的吗？我们做侵染不需要洗的，用台子的风机吹干，，以后会长菌，但影响不大
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10楼2015-02-03 15:10:42
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