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玛格丽特1985

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化农杆菌

各位虫友，我最近在做目的片段连接植物表达载体，准备转农杆菌的，目的片段800bp，植物表达载体10kb左右，但连接后涂板总是长1个菌落，要么就不长，很着急啊！希望大家帮忙分析一下原因！谢谢！
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1楼 2011-12-01 21:35:21
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励积极应助 2011-12-08 18:51:37
如果是阳性，一个不就可以了吗？你转得什么长一个啊，农杆菌转化效率本来就很低的。
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生命不息，探索不止。
2楼2011-12-01 22:29:03
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jiying198509

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+1): 还有新虫积极交流哦~ 2011-12-08 18:51:53
西瓜(金币+1): 打错，是“欢迎”，呵呵~ 2011-12-08 18:52:13
先检测这个对不对啊 如果对了 一个就一个 也无所谓 如果不对 下次多转几次 但是农杆菌转化应该很简单 转化率也不是很低 应该可以的
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3楼2011-12-02 15:12:59
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

估计是农杆菌感受态细胞不怎么好。你用的什么方法转的呀？我们实验室用点击法效率很高
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
4楼2011-12-05 20:51:56
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jidixueli

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

把你得到的阳性菌落摇了 提出质粒转回大肠杆菌 再提质粒鉴定一下
我转水稻是这么做的
不知道你的是否适用
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5楼2011-12-05 22:45:20
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leymus

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): Good！一般都是这样！ 2011-12-08 18:52:39
连接产物应该先转入大肠杆菌，通过PCR或酶切或测序验证其正确后，将连接正确的质粒再转入农杆菌中，这样比较稳妥，我们实验室都是这样做的。
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6楼2011-12-08 12:34:34
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