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玛格丽特1985

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化农杆菌

各位虫友,我最近在做目的片段连接植物表达载体,准备转农杆菌的,目的片段800bp,植物表达载体10kb左右,但连接后涂板总是长1个菌落,要么就不长,很着急啊!希望大家帮忙分析一下原因!谢谢!
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励积极应助 2011-12-08 18:51:37
如果是阳性,一个不就可以了吗?你转得什么长一个啊,农杆菌转化效率本来就很低的。
生命不息,探索不止。
2楼2011-12-01 22:29:03
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jiying198509

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+1): 还有新虫积极交流哦~ 2011-12-08 18:51:53
西瓜(金币+1): 打错,是“欢迎”,呵呵~ 2011-12-08 18:52:13
先检测这个对不对啊 如果对了 一个就一个 也无所谓 如果不对 下次多转几次 但是农杆菌转化应该很简单 转化率也不是很低 应该可以的
3楼2011-12-02 15:12:59
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

估计是农杆菌感受态细胞不怎么好。你用的什么方法转的呀?我们实验室用点击法效率很高
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
4楼2011-12-05 20:51:56
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jidixueli

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

把你得到的阳性菌落摇了 提出质粒转回大肠杆菌 再提质粒鉴定一下
我转水稻是这么做的
不知道你的是否适用
5楼2011-12-05 22:45:20
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leymus

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): Good!一般都是这样! 2011-12-08 18:52:39
连接产物应该先转入大肠杆菌,通过PCR或酶切或测序验证其正确后,将连接正确的质粒再转入农杆菌中,这样比较稳妥,我们实验室都是这样做的。
6楼2011-12-08 12:34:34
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