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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 农杆菌转化问题
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 农杆菌转化问题

各位虫友：
      今天我在利福平卡纳庆大平板上挑的单克隆张的颜色怎么是紫红色的啊？莫非挑的都是杂菌？
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1楼2011-08-17 21:21:22
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lihuaannie

新虫 (初入文坛)
常用作转化的就几株农杆菌而已，没见过这种颜色的农杆菌，应该是杂菌吧
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2楼2011-08-18 17:55:09
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

liaoyh(金币+1): 2011-08-27 15:42:18
liaoyh(金币+1): 谢谢谢谢 2011-09-03 18:55:13
如果不确定的话就重新复苏吧
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风雪夜归人
3楼2011-08-21 20:36:08
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xiaohouo0(金币+3): 同意您的观点。 2011-08-26 16:18:14
liaoyh(金币+1): 2011-08-27 15:42:32
liaoyh(金币+1): 很好，不错 2011-09-03 18:54:09
楼主，做任何实验都要做阴阳对照，以后实验也是如此。
因为你没有说阴阳对照的事，因此，只能说可能是杂菌，建议重做。
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4楼2011-08-22 08:50:43
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zouhongda

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

liaoyh(金币+1): 不错不错 2011-09-03 18:54:32
红色的应为杂菌，你是转化后涂的平板吧。长了多长时间？
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5楼2011-08-24 20:46:16
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Petter_JDW

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xiaohouo0(金币+3): 感谢应助交流！ 2011-08-26 16:19:16
liaoyh(金币+3): 2011-08-27 15:42:53
liaoyh(金币+1): 不粗不错 2011-09-03 18:54:49
amisking: APEPI+1, good！ 2012-03-19 20:22:50
利福平就是颜色很深啊~可能长在上面会出现变红~师姐转化农杆菌筛选转化子也出现过带红色的菌落~~你可以检测一下

农杆菌的生化检测
1. 取-70℃保存的农杆菌于含有25 μg/ml利福平YEB固体培养基平板上划线培养，28℃培养2天。
2. 挑取单菌落接种于10 ml含有25 μg/ml利福平YEB液体培养基中，220 rpm，28℃振荡培养过夜。
3. 將农杆菌菌液涂在lactose固体培养基平板上，28℃下培养约2天。
4. 以少许本氏液（Benedict’s reagent）倒入平板中进行染色，一小时后菌落周围呈黃色即为农杆菌。
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6楼2011-08-24 22:42:06
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2011-08-22 08:50:43:
楼主，做任何实验都要做阴阳对照，以后实验也是如此。
因为你没有说阴阳对照的事，因此，只能说可能是杂菌，建议重做。

谢谢，我有对照的，在不加菌的培养液里面也出现了这种情况，而挑取的菌液培养物做pcr鉴定的时候有目的条带
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7楼2011-08-26 13:15:59
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zouhongda at 2011-08-24 20:46:16:
红色的应为杂菌，你是转化后涂的平板吧。长了多长时间？

我觉得应该是培养基的问题，我用自己配得培养基和买的成品培养基做过对照，自己配得才会出现这种 ？问题，但我不知道为什么会出现这样的问题，是ph？还是
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8楼2011-08-27 15:45:26
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zouhongda

木虫 (小有名气)
自己配也不太会出现这种问题吧。农杆菌用YEP，YEB，LB都是可以的，ph值在7.0-7.2即可。
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9楼2011-08-28 10:19:30
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