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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】农杆菌转化
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匿名

用户注销 (著名写手)
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1楼2011-01-06 11:12:14
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chenyuqin

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
呵呵，先转化大肠杆菌，然后提质粒，如果你的载体都酶切验证对的话就可以转化农杆菌了。转化了农杆菌不容易提质粒，菌落PCR验证就OK了。
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where there is a will,there ia a way.
2楼2011-01-06 14:04:17
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
其实只要摇3ml菌就行，很建议电击转化，每一次转化1ul-5ul，农杆菌感受态制备也很简单。农杆菌的质粒拷贝数很低，建议PCR验证扩增40个Cycle。
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3楼2011-01-06 14:24:47
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yabxxh

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
摇的菌够你提质粒行了，我一般摇15ml，当然是可以用质粒小提的。另农杆菌质粒容易丢失，最好多做几个stock，复苏的时候也不要划版，直接用灭菌枪头吸取菌液，或挑取冰渣，好运
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4楼2011-01-06 16:18:01
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070250035

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
2楼: Originally posted by chenyuqin at 2011-01-06 14:04:17
呵呵，先转化大肠杆菌，然后提质粒，如果你的载体都酶切验证对的话就可以转化农杆菌了。转化了农杆菌不容易提质粒，菌落PCR验证就OK了。

菌P不是假阳性很高吗？
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探究知识的海洋
5楼2013-05-22 14:37:24
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chenyuqin

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 070250035 at 2013-05-22 14:37:24
菌P不是假阳性很高吗？...

农杆菌的还好吧，假阳性率比较低，否则你可以测序的~~
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where there is a will,there ia a way.
6楼2013-05-23 12:33:46
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