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695

木虫 (职业作家)

[交流] 【求助/交流】农杆菌菌落 已有10人参与

大家好,想请教下在做转基因的朋友们关于农杆菌!构建好的质粒转进去农杆菌感受态EHA105里,平板是YEB, RIF抗性和质粒的Spec抗性筛选,想问问这个菌落长出来应该有什么特征,看网上有人说偏黄色,菌面有点粘,易扎堆,感觉都不是主要特征,我现在的板子因为加了利福平之后,整个板子都是偏黄的,看着菌落几乎是白色的,这样的算正常吗?菌落PCR验证是对的。谢谢
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-01 09:18:14
引用回帖:
8楼: Originally posted by yuanzou2011 at 2013-06-30 21:00:31
多谢回复!还想问下就是我的重组质粒转入农杆菌EHA105,平板是抗利福平和Spec,长了2天了,只看到有两三个小小的透明的菌落,那个是农杆菌吗?而且我将这些菌落转到Rif, Kam, Hyo的液体培养基培养过夜,还是好稀,是 ...

首先检查你使用的抗生素是否正确,另外,配置抗生素的时候最好过滤除菌,没有问题的话,只有几个透明菌落也不奇怪,很可能你的感受态菌状态不好,效率偏低。液体培养的话,我的经验是28-30度过夜,可以长得很浑浊。
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
9楼2013-07-01 00:26:58
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+5):欢迎发帖交流! 2010-06-30 20:30:34
农杆菌菌落稍微有点黄,但是和加了利福平的板子比起来肯定要浅多了,比大肠杆菌菌落颜色深。

PCR验证对的话应该没什么问题,可以提质粒酶切鉴定一下,不过农杆菌质粒不太好提。

加了利福平的话一般不会有杂菌的
2楼2010-06-30 19:56:18
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-06-30 21:55:17
板子发黄主要是培养基和抗生素的颜色,菌落生长两天后一般就很大了,菌落透明,比较湿润。。。。
你的质粒spe抗性,什么质粒啊,我的质粒也有spe抗性的。。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-06-30 21:32:47
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695

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-30 19:56:18:
农杆菌菌落稍微有点黄,但是和加了利福平的板子比起来肯定要浅多了,比大肠杆菌菌落颜色深。

PCR验证对的话应该没什么问题,可以提质粒酶切鉴定一下,不过农杆菌质粒不太好提。

加了利福平的话一般不会有杂 ...

多谢回复,祝一切顺利!
4楼2010-07-01 00:39:48
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