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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR筛选
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yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 天鸟 at 2012-02-27 09:48:35:
用的载体的引物扩增，一般不会出现你说的DH5a里有的情况吧

我是用的片段引物，只是不明白为什么出现这种情况啊
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11楼2012-02-27 11:22:41
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kingsoo

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗生素直接混在培养基里，再倒平板，减少误差。加抗生素时培养基温度不要太高，刚好不烫手。
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12楼2012-02-27 12:49:54
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晓风残月cl

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
yeshui(金币+1): 2012-02-28 15:46:10
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-02-28 16:38:54
关于长菌少的分析：
1.   培养时间过短  菌落没长好   能看到很多小小的菌落
2.   涂板时  涂棒温度过要    需要稍微冷却会儿再涂板   
3.    氨苄青霉素浓度过高  
个人观点  仅供参考
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13楼2012-02-27 23:32:01
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

yeshui(金币+1): 2012-02-28 15:44:56
引用回帖:
9楼: Originally posted by yeshui at 2012-02-27 11:18:49:
没有的话，做PCR怎么会扩出来呢，我就是不明白，请指教啊

我的意思不是说你是否转进了这个片段，而是DH5α本身是否就有这个片段，如果DH5α本身就有这个片段，当然能扩出来了！你做PCR时是否做了正负对照？
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14楼2012-02-28 00:32:13
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hjb2010

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以把抗生素提前加到涂布的培养基里，那样会更均匀一些，你最好是转接的培养基和你第一批的培养基各方面保持一致，包括抗生素浓度
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15楼2012-02-28 11:37:52
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yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by yguang at 2012-02-28 00:32:13:
我的意思不是说你是否转进了这个片段，而是DH5α本身是否就有这个片段，如果DH5α本身就有这个片段，当然能扩出来了！你做PCR时是否做了正负对照？

这个不可能会有吧
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16楼2012-02-28 15:45:24
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yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 晓风残月cl at 2012-02-27 23:32:01:
关于长菌少的分析：
1.   培养时间过短  菌落没长好   能看到很多小小的菌落
2.   涂板时  涂棒温度过要    需要稍微冷却会儿再涂板   
3.    氨苄青霉素浓度过高  
个人观点  仅供参考

三种原因都可以排除掉的
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17楼2012-02-28 15:46:46
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smilerion

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把你的片段转化试试看是不是也生长也能扩出来呢？片段是酶切质粒还是PCR得到的，可能是片段没有处理好。菌检的时候最好用条基因引物和载体引物来检。
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18楼2012-02-29 00:00:35
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