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11楼2012-02-27 11:22:41

kingsoo

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抗生素直接混在培养基里，再倒平板，减少误差。加抗生素时培养基温度不要太高，刚好不烫手。

12楼2012-02-27 12:49:54

晓风残月cl

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yeshui(金币+1): 2012-02-28 15:46:10
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-02-28 16:38:54

关于长菌少的分析：
1. 培养时间过短  菌落没长好能看到很多小小的菌落
2. 涂板时  涂棒温度过要需要稍微冷却会儿再涂板
3. 氨苄青霉素浓度过高
个人观点  仅供参考

13楼2012-02-27 23:32:01

yguang

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yeshui(金币+1): 2012-02-28 15:44:56

引用回帖:

9楼: Originally posted by yeshui at 2012-02-27 11:18:49:
没有的话，做PCR怎么会扩出来呢，我就是不明白，请指教啊

我的意思不是说你是否转进了这个片段，而是DH5α本身是否就有这个片段，如果DH5α本身就有这个片段，当然能扩出来了！你做PCR时是否做了正负对照？

14楼2012-02-28 00:32:13

hjb2010

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你可以把抗生素提前加到涂布的培养基里，那样会更均匀一些，你最好是转接的培养基和你第一批的培养基各方面保持一致，包括抗生素浓度

15楼2012-02-28 11:37:52

yeshui

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引用回帖:

楼: Originally posted by yguang at 2012-02-28 00:32:13:
我的意思不是说你是否转进了这个片段，而是DH5α本身是否就有这个片段，如果DH5α本身就有这个片段，当然能扩出来了！你做PCR时是否做了正负对照？

这个不可能会有吧

16楼2012-02-28 15:45:24

yeshui

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引用回帖:

楼: Originally posted by 晓风残月cl at 2012-02-27 23:32:01:
关于长菌少的分析：
1. 培养时间过短  菌落没长好能看到很多小小的菌落
2. 涂板时  涂棒温度过要需要稍微冷却会儿再涂板
3. 氨苄青霉素浓度过高
个人观点  仅供参考

三种原因都可以排除掉的

17楼2012-02-28 15:46:46

smilerion

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你把你的片段转化试试看是不是也生长也能扩出来呢？片段是酶切质粒还是PCR得到的，可能是片段没有处理好。菌检的时候最好用条基因引物和载体引物来检。

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18楼2012-02-29 00:00:35