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yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR筛选

将片段与载体连接后,转化DH5α,LB板含有抗生素,结果菌落长的特别少,而且只是在边上长,进行菌落PCR筛选,结果都有目的条带,但是,经过筛选的菌落划到另一块涂有抗生素的LB平板上却不长,是怎么回事呢?我感觉自己图的板还算均匀
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晓风残月cl

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
yeshui(金币+1): 2012-02-28 15:46:10
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-02-28 16:38:54
关于长菌少的分析:
1.   培养时间过短  菌落没长好   能看到很多小小的菌落
2.   涂板时  涂棒温度过要    需要稍微冷却会儿再涂板   
3.    氨苄青霉素浓度过高  
个人观点  仅供参考
13楼2012-02-27 23:32:01
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗生素浓度是否合适?
质粒是否丢了?
try again
god bless
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2012-02-26 21:37:07
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biotech_100

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是抗生素浓度的问题吧!边上能长出来,可能是因为培养基中抗生素没混匀好吧,所以只有边上能长。两次的LB培养基都是同一批倒的平板吗?
3楼2012-02-26 22:40:02
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你要扩的片段DH5α里有吗,这是个比较愚蠢的问题,但好多新手都会忽略。
4楼2012-02-27 00:28:37
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