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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌落PCR筛选
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yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR筛选

将片段与载体连接后，转化DH5α，LB板含有抗生素，结果菌落长的特别少，而且只是在边上长，进行菌落PCR筛选，结果都有目的条带，但是，经过筛选的菌落划到另一块涂有抗生素的LB平板上却不长，是怎么回事呢？我感觉自己图的板还算均匀
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1楼 2012-02-26 21:20:47
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗生素浓度是否合适？
质粒是否丢了？
try again
god bless
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2012-02-26 21:37:07
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biotech_100

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是抗生素浓度的问题吧！边上能长出来，可能是因为培养基中抗生素没混匀好吧，所以只有边上能长。两次的LB培养基都是同一批倒的平板吗？
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3楼2012-02-26 22:40:02
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要扩的片段DH5α里有吗，这是个比较愚蠢的问题，但好多新手都会忽略。
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4楼2012-02-27 00:28:37
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
摇个菌，提个质粒，酶切一下先。平板的抗性注意别弄错。
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yeshui
何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
5楼2012-02-27 09:41:44
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天鸟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yguang at 2012-02-27 00:28:37:
你要扩的片段DH5α里有吗，这是个比较愚蠢的问题，但好多新手都会忽略。

用的载体的引物扩增，一般不会出现你说的DH5a里有的情况吧
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快乐生活，我快乐
6楼2012-02-27 09:48:35
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普通回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 天使托 at 2012-02-26 21:37:07:
抗生素浓度是否合适？
质粒是否丢了？
try again
god bless

我一直都用那个浓度啊，做了两次了，而且是三个载体一块做的啊，奇怪了
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7楼2012-02-27 11:15:55
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yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by biotech_100 at 2012-02-26 22:40:02:
应该是抗生素浓度的问题吧！边上能长出来，可能是因为培养基中抗生素没混匀好吧，所以只有边上能长。两次的LB培养基都是同一批倒的平板吗？

两批板啊，我的抗生素是先倒板再涂布抗生素，然后再涂布菌，以前都那样图，感觉不是没涂匀
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8楼2012-02-27 11:17:47
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yeshui

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by yguang at 2012-02-27 00:28:37:
你要扩的片段DH5α里有吗，这是个比较愚蠢的问题，但好多新手都会忽略。

没有的话，做PCR怎么会扩出来呢，我就是不明白，请指教啊
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9楼2012-02-27 11:18:49
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yeshui

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hongqifei at 2012-02-27 09:41:44:
摇个菌，提个质粒，酶切一下先。平板的抗性注意别弄错。

确定抗性没弄错，摇哪个菌啊？
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10楼2012-02-27 11:19:58
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