24小时热门版块排行榜    

查看: 3274  |  回复: 17

yeshui

铁虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR筛选

将片段与载体连接后,转化DH5α,LB板含有抗生素,结果菌落长的特别少,而且只是在边上长,进行菌落PCR筛选,结果都有目的条带,但是,经过筛选的菌落划到另一块涂有抗生素的LB平板上却不长,是怎么回事呢?我感觉自己图的板还算均匀
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗生素浓度是否合适?
质粒是否丢了?
try again
god bless
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2012-02-26 21:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biotech_100

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是抗生素浓度的问题吧!边上能长出来,可能是因为培养基中抗生素没混匀好吧,所以只有边上能长。两次的LB培养基都是同一批倒的平板吗?
3楼2012-02-26 22:40:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你要扩的片段DH5α里有吗,这是个比较愚蠢的问题,但好多新手都会忽略。
4楼2012-02-27 00:28:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
摇个菌,提个质粒,酶切一下先。平板的抗性注意别弄错。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
5楼2012-02-27 09:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天鸟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yguang at 2012-02-27 00:28:37:
你要扩的片段DH5α里有吗,这是个比较愚蠢的问题,但好多新手都会忽略。

用的载体的引物扩增,一般不会出现你说的DH5a里有的情况吧
快乐生活,我快乐
6楼2012-02-27 09:48:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 天使托 at 2012-02-26 21:37:07:
抗生素浓度是否合适?
质粒是否丢了?
try again
god bless

我一直都用那个浓度啊,做了两次了,而且是三个载体一块做的啊,奇怪了
7楼2012-02-27 11:15:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by biotech_100 at 2012-02-26 22:40:02:
应该是抗生素浓度的问题吧!边上能长出来,可能是因为培养基中抗生素没混匀好吧,所以只有边上能长。两次的LB培养基都是同一批倒的平板吗?

两批板啊,我的抗生素是先倒板再涂布抗生素,然后再涂布菌,以前都那样图,感觉不是没涂匀
8楼2012-02-27 11:17:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by yguang at 2012-02-27 00:28:37:
你要扩的片段DH5α里有吗,这是个比较愚蠢的问题,但好多新手都会忽略。

没有的话,做PCR怎么会扩出来呢,我就是不明白,请指教啊
9楼2012-02-27 11:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yeshui

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hongqifei at 2012-02-27 09:41:44:
摇个菌,提个质粒,酶切一下先。平板的抗性注意别弄错。

确定抗性没弄错,摇哪个菌啊?
10楼2012-02-27 11:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yeshui 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 5/250 2026-08-24 21:51 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +6 scalable 2026-08-24 6/300 2026-08-24 20:28 by 苦寒来香
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见