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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
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飞侠8683

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？

这段时间做的连接转化到DH5α后，挑取单菌落进行PCR，能扩出目的片段，但是进一步提取质粒后跑电泳却比空质粒还小，跑到前面去了，是什么原因呢？好几次都是这样？
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1楼 2010-12-06 14:17:16
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)
飞侠8683(金币+1): 2010-12-07 09:24:17
质粒的问题，线性，环状，跑的速度也不一样
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4楼2010-12-06 16:37:12
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★
飞侠8683(金币+1): 2010-12-06 14:40:53
dhd997(金币+2):good 2010-12-06 15:54:24
质粒单酶切了么？
重组质粒和空质粒都单酶切成线性片段再比较大小
重组质粒还可以双酶切把插入片段切下来看看大小对不对
菌落PCR不如质粒酶切鉴定准确
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2楼2010-12-06 14:19:59
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飞侠8683

新虫 (小有名气)
谢谢！我现在也只能酶切试试看
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3楼2010-12-06 14:41:39
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head2004

新虫 (初入文坛)
我之前也做过菌落PCR鉴定，本来是没有连接成功，但PCR出来结果却有目的片段大小的条带，所以说菌落PCR并不是很可信。
建议最好是提质粒酶切鉴定，虽然麻烦一些
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5楼2010-12-09 11:46:43
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