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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助—连上质粒的片段切不下来
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吴德光

禁虫 (小有名气)
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吴德光

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1楼 2011-09-25 17:05:48
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-09-25 20:59:10
我去 这个问题我也遇到过  菌落PCR鉴定是阳性 质粒抽出来大小也对 可就是酶切切不开  郁闷的我 后来不得已又重新连的给连好的
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冷风过心变热
2楼2011-09-25 18:33:57
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aayqaa

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励应助。 2011-09-25 20:59:27
看不到不一定是没切下来，测序正确的话应该没问题，一般切下来的条带会很淡，可以试试在电泳时多加点样，有时候是需要用意念来看到的，呵呵
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3楼2011-09-25 19:19:44
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xt123xt

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

目的片段如果太小就可能不明显
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4楼2011-09-25 20:02:18
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xt123xt

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-09-25 20:59:38
用眼睛的余光看 不要集中注意力正面看
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5楼2011-09-25 20:03:27
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清风寨

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aayqaa at 2011-09-25 19:19:44:
看不到不一定是没切下来，测序正确的话应该没问题，一般切下来的条带会很淡，可以试试在电泳时多加点样，有时候是需要用意念来看到的，呵呵

测序都正确 无论加样多少都不行  就是切不开 换了新的酶也不行  可是重新连的一切就开
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冷风过心变热
6楼2011-09-26 08:31:35
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

有可能酶切位点的地方有碱基突变了。
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Thank-you，so-blue.
7楼2011-09-26 10:53:12
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good！很活跃啊！ 2011-09-27 14:16:49
吴德光(金币+4): 谢谢，您的分析很好，我试试，我连的片段有两个300左右，还有一个1600 2011-10-07 22:49:15
酶是不是有问题？用两种酶分别做次单酶切，点个质粒作对照看看这两个酶是不是有问题。buffer也检查一下……连接的片段有多大？
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8楼2011-09-27 10:37:00
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原韬

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

单酶双切有时候会有这样的问题，选择一下加入另一种酶做个双酶双切，看看能不能切出特异条带
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9楼2011-09-29 09:55:08
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临风7071

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-09-29 18:44:39
最有可能的是你选的酶切位点在大肠杆菌中被甲基化了，识别不了。
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10楼2011-09-29 11:43:51
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