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xiangquanju

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌 已有11人参与

请问大家做过将酿酒酵母的质粒转化大肠杆菌吗,怎么就转不出来呢~~~
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erin在榆中

新虫 (初入文坛)

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wanhscn(金币+3): 鼓励新虫多发贴!鼓励多来分子生物版! 2011-10-28 18:03:51
我也遇到了这个问题……我使用缺陷型培养基摇培得到酵母,然后提的质粒。但热激转化大肠杆菌DH5α(42° 90s),完全没有长出菌斑……很是忧伤……我怀疑是质粒提取浓度太低,杂质太多。请问楼主是如何进行酵母质粒提取的?本人邮箱,gongxue.erin@gmail.com   望不吝赐教
7楼2011-10-28 00:08:50
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是穿梭质粒的话,和大肠杆菌一般的质粒一样的转法,为啥就转不出来呢?
Thank-you,so-blue.
2楼2010-06-10 14:48:14
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

你说的详细一下吧,不太清楚!
3楼2010-06-10 14:58:34
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3):欢迎分享经验! 2010-06-10 22:18:22
如果不是穿梭质粒的话,质粒上没有大肠杆菌的复制起点,即使转进去也不能复制

如果是穿梭质粒的话,和普通质粒没有什么区别。

如果质粒比较大的话可能难转一些,也要注意质粒的质量。

另外楼主说的“转不出来”指什么,转进去不复制\不表达还是筛不到阳性克隆还是什么?
4楼2010-06-10 15:16:22
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