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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌 已有11人参与

请问大家做过将酿酒酵母的质粒转化大肠杆菌吗，怎么就转不出来呢~~~
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1楼 2010-06-10 11:25:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

超然渡陈

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般试剂盒提取的酵母质粒浓度都非常低，电泳10 ul也很难看到条带，用热激转化大肠杆菌时长不出来菌很正常。我们是提取的酵母质粒用电转化大肠杆菌，没出现长不出来的情况。实验室也有制备超级感受态转化酵母提取的质粒的，不过我觉得不是太必要。超级感受态的制备太麻烦，电转化已经能够满足要求。文献说电转化是热激转化效率的20-30倍，个人觉得没那么高，也就高5倍左右。
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11楼2013-08-08 10:08:00
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普通回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是穿梭质粒的话，和大肠杆菌一般的质粒一样的转法，为啥就转不出来呢？
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-06-10 14:48:14
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小周

铁杆木虫 (著名写手)
你说的详细一下吧，不太清楚！
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3楼2010-06-10 14:58:34
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):欢迎分享经验！ 2010-06-10 22:18:22
如果不是穿梭质粒的话，质粒上没有大肠杆菌的复制起点，即使转进去也不能复制

如果是穿梭质粒的话，和普通质粒没有什么区别。

如果质粒比较大的话可能难转一些，也要注意质粒的质量。

另外楼主说的“转不出来”指什么，转进去不复制\不表达还是筛不到阳性克隆还是什么？
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4楼2010-06-10 15:16:22
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jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
穿梭质粒肯定可以，看一下质粒图谱确定
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5楼2010-06-10 16:19:52
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
谢谢大家的回复，是穿梭质粒，已经找到原因啦，是因为我从酵母中提取质粒的时候，没有用选择培养基，没有给一个选择压力，可能导致质粒的大量丢失，所以也许根本就没有提取出质粒来
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6楼2010-06-12 10:08:45
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erin在榆中

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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wanhscn(金币+3): 鼓励新虫多发贴！鼓励多来分子生物版！ 2011-10-28 18:03:51
我也遇到了这个问题……我使用缺陷型培养基摇培得到酵母，然后提的质粒。但热激转化大肠杆菌DH5α（42° 90s），完全没有长出菌斑……很是忧伤……我怀疑是质粒提取浓度太低，杂质太多。请问楼主是如何进行酵母质粒提取的？本人邮箱，gongxue.erin@gmail.com   望不吝赐教
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7楼2011-10-28 00:08:50
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liwu2223

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
楼主，你的实验咋样了啊？提酵母质粒转大肠，成功没有啊？
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天未降大任于斯，我也苦其心智，劳其筋骨！
8楼2011-11-21 13:33:39
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jzyzqbx

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
酿酒酵母的质粒拷贝数本来就很低，我转的长得不多
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9楼2011-11-22 10:30:30
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17xlonly

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by erin在榆中 at 2011-10-28 00:08:50
我也遇到了这个问题……我使用缺陷型培养基摇培得到酵母，然后提的质粒。但热激转化大肠杆菌DH5α（42° 90s），完全没有长出菌斑……很是忧伤……我怀疑是质粒提取浓度太低，杂质太多。请问楼主是如何进行酵母质粒 ...

你好  我想问你一下，您最好转出来了吗？你的条件是怎样的？  我用选择培养基培养酵母，试剂盒提了酵母质粒，PCR检测可以扩增出来，转到大肠杆菌里面平板上没有长出来。
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10楼2013-08-08 08:50:20
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