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【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
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xiangquanju
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专业: 生物化学
[交流]
【求助/交流】酿酒酵母质粒转化大肠杆菌
已有11人参与
请问大家做过将酿酒酵母的质粒转化大肠杆菌吗,怎么就转不出来呢~~~
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1楼
2010-06-10 11:25:57
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超然渡陈
金虫
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性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般试剂盒提取的酵母质粒浓度都非常低,电泳10 ul也很难看到条带,用热激转化大肠杆菌时长不出来菌很正常。我们是提取的酵母质粒用电转化大肠杆菌,没出现长不出来的情况。实验室也有制备超级感受态转化酵母提取的质粒的,不过我觉得不是太必要。超级感受态的制备太麻烦,电转化已经能够满足要求。文献说电转化是热激转化效率的20-30倍,个人觉得没那么高,也就高5倍左右。
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11楼
2013-08-08 10:08:00
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susizheng
木虫
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专业: 有机合成
★
小木虫(金币
+0.5
):给个红包,谢谢回帖交流
是穿梭质粒的话,和大肠杆菌一般的质粒一样的转法,为啥就转不出来呢?
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Thank-you,so-blue.
2楼
2010-06-10 14:48:14
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小周
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专业: 抗体工程学
你说的详细一下吧,不太清楚!
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3楼
2010-06-10 14:58:34
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ben1147
木虫
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专业: 微生物生理与生物化学
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小木虫(金币
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):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3):欢迎分享经验! 2010-06-10 22:18:22
如果不是穿梭质粒的话,质粒上没有大肠杆菌的复制起点,即使转进去也不能复制
如果是穿梭质粒的话,和普通质粒没有什么区别。
如果质粒比较大的话可能难转一些,也要注意质粒的质量。
另外楼主说的“转不出来”指什么,转进去不复制\不表达还是筛不到阳性克隆还是什么?
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4楼
2010-06-10 15:16:22
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