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bleach060452

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-14 17:34:23
引用回帖:
7楼: Originally posted by 易水寒明 at 2013-08-14 15:16:49
那该怎么办啊?我质粒都构建了好久了,还没有连接上...

具体还是得看你的蛋白和实验目的,大肠杆菌表达挺不靠谱的,凡是结构复杂、分子量过大、修饰多的蛋白都很麻烦,无论是表达量还是活性。

看到你说做体外激酶活性,不太了解,但估计需要活性和表达量兼得。那么对于E.coli可以尝试,但估计意义不大,还浪费大量时间、成本;考虑一下其他表达系统吧。

个人简介,仅供参考
岂能尽如人意,但求无愧我心
11楼2013-08-14 17:10:46
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929519755

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by 易水寒明 at 2013-08-14 15:19:00
那请问用哺乳动物细胞表达,用免疫沉淀纯化行不行啊?我用来做体外激酶反应测试的。...

我不懂哺乳动物细胞表达。关键你的那个蛋白太大,不然可以尝试酵母表达¥……
想你没话说
12楼2013-08-15 11:07:54
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易水寒明

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 929519755 at 2013-08-15 11:07:54
我不懂哺乳动物细胞表达。关键你的那个蛋白太大,不然可以尝试酵母表达¥……...

酵母表达太麻烦,而且不熟悉。
13楼2013-08-15 18:51:46
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