| 查看: 3740 | 回复: 10 | ||
[求助]
表达载体的转化实验 已有5人参与
|
||
| T载体的转化，我使用的是DH5a 感受态。准备做表达，看了一些文献，好像表达载体都用的BL21,两种感受态有什么区别？表达过程不能用DH5a 吗 |
回复此楼» 猜你喜欢
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有190人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR产物连T载体转化后，阳性率低
已经有9人回复
- 关于表达载体 转化大肠杆菌 进行扩繁的问题
已经有9人回复
- 植物表达载体及农杆菌菌株
已经有4人回复
- 有人做过双报告基因的过表达质粒载体么？
已经有5人回复
- 双顺反子 表达载体的构建——求助！
已经有8人回复
- 电击转化各种不长，求助啊~~~
已经有6人回复
- T载体的阴性对照菌落比实验组多
已经有3人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 寻求植物瞬时表达载体！
已经有10人回复
- 双元载体转化实验～总是失败
已经有3人回复
- 转化感受态后提取质粒，测浓度总是很低
已经有17人回复
- 原核表达载体构建老不成功，求助！
已经有20人回复
- 原核表达载体的构建
已经有37人回复
- 有关质粒转化结果
已经有17人回复
- 目的片段与表达载体的连接
已经有23人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 表达载体构建的相关问题
已经有15人回复
- 啤酒酵母质粒转化求助
已经有7人回复
- 克隆基因和载体连接后转化至大肠杆菌，为什么每次涂板都是空平板没有菌落？
已经有17人回复
- 【求助/交流】为什么我的PCR产物总是连接不上T载体
已经有26人回复
- 【求助/交流】酿酒酵母表达载体的构建问题
已经有6人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-05-16 13:18:34
gyesang: 回帖置顶 2014-05-16 13:18:36
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2014-05-18 17:54:52
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-05-16 13:18:34
gyesang: 回帖置顶 2014-05-16 13:18:36
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2014-05-18 17:54:52
|
首先你需明白几个不同的概念，1. T载体是克隆载体，你的基因通过TA克隆法插入载体，这一步的目的是扩增基因，得到大量你要的目的基因片段，以便进行下一步表达载体的构建；DH5α是克隆菌株，不能用来做表达；2. 欲在大肠杆菌中表达外源基因，需要首先构建原核表达载体，如可将构建至T载体的目的通过双酶切切下来然后连接到表达载体上，如PET系列的载体等，构建成原核表达载体后，可将此载体转化表达菌株，如BL21(DE3,)等，如果你的目的基因含有稀有密码子，也可以转化Rosetta系列的表达菌株。最后将构建成功的基因工程菌进行诱导表达。 祝好！ |
3楼2014-05-16 13:01:57
zhaozhibozhi
金虫 (正式写手)
- 应助: 112 (高中生)
- 金币: 1512.3
- 散金: 5
- 红花: 11
- 帖子: 480
- 在线: 444.9小时
- 虫号: 1763195
- 注册: 2012-04-18
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2014-05-16 10:39:11
随风飘摇11
木虫 (著名写手)
- 应助: 92 (初中生)
- 金币: 2284.9
- 散金: 606
- 红花: 53
- 帖子: 2249
- 在线: 818.5小时
- 虫号: 1146270
- 注册: 2010-11-14
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2014-05-16 21:23:07
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2014-05-17 17:18:05
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-05-18 17:52:07
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:53:16
感谢参与，应助指数 +1
呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-05-18 17:52:07
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-05-18 19:53:16
|
楼上诸位已经回答得很清楚了。我再补充几点： 1、T载体常用于克隆，一般来讲都会再把目的基因亚克隆到表达载体上。但是并非T载体不能用来表达。常见的pMD18-T，含有lacZ操纵子，可以IPTG诱导表达。pGEM-T则含有T7和SP6启动子。 2、为了能够顺利地使用T7系统来表达蛋白，在如BL21（DE3）一类的大肠杆菌菌株中，编码T7RNA聚合酶的基因被整合到其染色体上，并位于lacUV5启动子的下游，受乳糖操纵子调控。而目标蛋白的编码序列则被构建到含T7启动子序列的质粒上，并受T7RNA聚合酶调控转录。 3、构建质粒、基因表达看似比较成熟，也比较简单。其实这里面大有学问。学会看菌株和质粒的相关文档，答案就在其中。 补充一个与原题无关的知识：大家都知道蓝白斑筛选哈，不知道的去看教材。DH5a菌株可以用蓝白斑筛选，BL21不行。具体原因感兴趣的google。 |
6楼2014-05-17 22:19:00
7楼2014-05-18 17:53:45
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
- 应助: 183 (高中生)
- 金币: 3100.2
- 散金: 19
- 红花: 12
- 帖子: 1427
- 在线: 186.8小时
- 虫号: 2538789
- 注册: 2013-07-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
8楼2014-05-19 14:53:18
9楼2014-05-19 16:13:52
蜂鸟404
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 5703.9
- 散金: 17
- 红花: 30
- 帖子: 469
- 在线: 161.6小时
- 虫号: 2378242
- 注册: 2013-03-26
- 性别: GG
- 专业: 病原微生物变异与耐药
10楼2014-05-20 16:46:43
