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表达载体的转化实验 已有5人参与
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| T载体的转化，我使用的是DH5a 感受态。准备做表达，看了一些文献，好像表达载体都用的BL21,两种感受态有什么区别？表达过程不能用DH5a 吗 |
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9楼2014-05-19 16:13:52
zhaozhibozhi
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2楼2014-05-16 10:39:11
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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呀薯条: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢啊 2014-05-18 17:54:52
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首先你需明白几个不同的概念，1. T载体是克隆载体，你的基因通过TA克隆法插入载体，这一步的目的是扩增基因，得到大量你要的目的基因片段，以便进行下一步表达载体的构建；DH5α是克隆菌株，不能用来做表达；2. 欲在大肠杆菌中表达外源基因，需要首先构建原核表达载体，如可将构建至T载体的目的通过双酶切切下来然后连接到表达载体上，如PET系列的载体等，构建成原核表达载体后，可将此载体转化表达菌株，如BL21(DE3,)等，如果你的目的基因含有稀有密码子，也可以转化Rosetta系列的表达菌株。最后将构建成功的基因工程菌进行诱导表达。 祝好！ |
3楼2014-05-16 13:01:57
鬼羽帝魂
木虫 (著名写手)
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- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2014-05-17 17:18:05
