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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于表达载体 转化大肠杆菌 进行扩繁的问题 已有3人参与

我有个载体PFGC5941,卡那抗性,已验证正确,但是量太少,想转入大肠杆菌进行扩繁,已经转化了4,5次了,总是长不出菌落,原先是用50微升的感受态加0.5微升的质粒做转化,后又加大了质粒的量,改成3微升做转化,还是转不进去,难道还要加大量吗?
注:有的时候含卡那平板上也长出菌落,比较小,在含卡那的液体培养基中也能繁殖,但就是做菌液pcr验证没有目的条带

[ Last edited by yushijiang30 on 2014-3-16 at 15:45 ]
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ghqiu09

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2楼2014-03-16 20:39:10
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delicatepage

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ghqiu09 at 2014-03-16 20:39:10
那会不会是感受态的有问题了呢

我觉得可能是哎
心里的湖泊,温风吹过
3楼2014-03-17 05:32:30
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ghqiu09 at 2014-03-16 20:39:10
那会不会是感受态的有问题了呢

感受态一直在用,没发现什么问题啊, T载体转化都挺好的
4楼2014-03-17 09:07:20
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yushijiang30

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by delicatepage at 2014-03-17 05:32:30
我觉得可能是哎...

感受态一直在用,没发现什么问题啊, T载体转化都挺好的
5楼2014-03-17 09:08:23
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

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你做的时候是用热激法做的吗?说下过程我看看。
6楼2014-03-17 16:56:28
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

★
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7楼2014-03-17 21:57:24
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董红红

铜虫 (小有名气)

楼主,您好,我现在也遇到了同样的问题,不知道您的问题解决了吗?
8楼2016-10-11 15:09:51
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Freda_0829

新虫 (初入文坛)

逐个排除一下是不是抗生素的问题,倒平板的时候抗性比例对不对,如果所有比例都对,可以尝试一下先提质粒,再pcr或双酶切验证

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9楼2016-10-12 23:01:10
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病理小白

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 董红红 at 2016-10-11 15:09:51
楼主,您好,我现在也遇到了同样的问题,不知道您的问题解决了吗?

我现在正在痛苦,有解决吗?

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10楼2017-06-20 10:17:04
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