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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 不同载体上的GFP序列是否一样
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

[求助] 不同载体上的GFP序列是否一样 已有5人参与

最近在构载体，想带上GFP标签，实验室已有的质粒上的GFP序列不清楚，不同的载体上GFP序列一样吗？可以在NCBI上查到吗？因为目的基因和GFP只能分步连到酵母表达载体上去，感觉没有GFP序列怎么设计引物？小白一个，特求助还请懂的人指点一下
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天道酬勤
1楼 2014-01-05 10:47:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-05 16:05:58
你具体是什么载体呢？...

额，GFP应该是在瞬转表达载体上的，我找了找老师的博士论文上写的pT-GFP-MCS-COLD6最后连的是目的基因，我也不太懂这个是什么载体。现在就是想把它连同GFP转到酵母表达载体上，因为酶切位点不一样，没法直接切下来就酶连，现在就是不知道GFP序列，一筹莫展

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天道酬勤
5楼2014-01-05 16:49:48
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普通回帖

liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
随风飘摇11: 金币+2, ★有帮助, 因为我载体上的GFP序列不知道，但是想用这个作为模板扩，这样的话没有序列，引物该怎么设计？ 2014-01-05 11:01:31
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-01-05 12:43:40
很一样，RFP等相关蛋白开始序列基本一样，只在中间有差别

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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
2楼2014-01-05 10:56:09
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
随风飘摇11: 金币+2, ★有帮助, 看了，发现有些不一样。最主要就是我手里有的载体上的GFP序列不知道 2014-01-05 15:43:39
你可以下载几个带GFP的质粒的序列，然后自己比对看看，然后用你手头上已有的GFP序列为模板设计引物，
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2014-01-05 15:20:26
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-05 15:20:26
你可以下载几个带GFP的质粒的序列，然后自己比对看看，然后用你手头上已有的GFP序列为模板设计引物，

你具体是什么载体呢？
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-01-05 16:05:58
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wushm388

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
随风飘摇11: 金币+2, ★有帮助, 没有图，打算下午去问老师了，问了实验室的师兄师姐们也都不清楚 2014-01-06 10:32:06
有质粒图吗？测个序就知道序列了，不用犯愁的。
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6楼2014-01-06 10:09:28
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
随风飘摇11: 金币+2, ★有帮助, 我在NCBI上查了，不同载体上GFP序列不太一样。谢谢你 2014-01-06 12:03:15
GFP不论是真核或者原核中序列都一样。

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7楼2014-01-06 10:49:29
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ixido

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
随风飘摇11: 金币+2, ★有帮助, 嗯，谢谢。打算去问老师，载体是老师给的 2014-01-06 12:02:01
还是建议测序，尽管GFP序列基本上是一样的，但是有些GFP的序列可能经过优化或者为了特定的用途进行过突变。
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8楼2014-01-06 11:41:50
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by huguangdong at 2014-01-06 10:49:29
GFP不论是真核或者原核中序列都一样。

氨基酸必定是一样的，密码子可能会有所不同，兼并性而已。不同物种核苷酸偏好不同。

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9楼2014-01-06 17:24:43
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by huguangdong at 2014-01-06 17:24:43
氨基酸必定是一样的，密码子可能会有所不同，兼并性而已。不同物种核苷酸偏好不同。
...

是这样的，我要从载体上扩GFP，然后连到另一个载体上，但是不知道他的核苷酸序列，那引物不是不好设计吗？

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天道酬勤
10楼2014-01-06 18:24:20
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