应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PBI121载体转化拟南芥，Tail-PCR扩增整合位点侧翼序列，为何只扩增得到载体部分序列？
171/2返回列表12下一页
查看: 2649  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dfm1987

新虫 (初入文坛)

[求助] PBI121载体转化拟南芥，Tail-PCR扩增整合位点侧翼序列，为何只扩增得到载体部分序列？ 已有1人参与

我用热不对称方法扩增PBI121载体转化拟南芥得到的转化子的T-DNA整合位点侧翼序列；上游简并引物和下游特异性序列（RB区域）都是别人文献当中用过的，但是第三轮引物扩增的结果1000bp左右，经测序结果验证依然是PBI121的序列（RB区域上游）。我一直以为PBI121的整合特点是从RB和LB区域断开，整合到植物基因组中，但是我扩增出的结果又好像不是。求解，请各位大侠帮帮忙！还有一般大家是用哪种方法扩增T-DNA整合位点侧翼序列的？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-05 16:35:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-10 18:36:12
建议LZ先找到断裂位点，再设计特异嵌套式引物进行tail-PCR，这样更加靠谱！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-04-08 20:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfm1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 太极拳 at 2012-04-08 20:50:57:
建议LZ先找到断裂位点，再设计特异嵌套式引物进行tail-PCR，这样更加靠谱！

一般文献的说法是从RB和LB区域断裂，所以就在此区域设计了引物，结果扩出来的结果不是预期的，所以不知道是哪里出了问题。想了解一下有没有人遇到过这种情况。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-04-10 00:11:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

chengdongmey

金虫 (小有名气)

All is well.

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主转化的时候没有线性化质粒吗？
赞一下 回复此楼
Alliswell.
3楼2012-04-08 22:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfm1987

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chengdongmey at 2012-04-08 22:16:41:
楼主转化的时候没有线性化质粒吗？

采用的农杆菌介导转化拟南芥，就是构了PBI121的重组质粒，然后转化农杆菌，用农杆菌侵染拟南芥，好像没有看到说要有线性化质粒的步骤。
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-10 00:05:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

一般是一般，但是你现在得到得结果不是一般，所以要重新确定，一段段设计引物扩增。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

dfm1987
6楼2012-04-10 09:48:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfm1987

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 太极拳 at 2012-04-10 09:48:41:
一般是一般，但是你现在得到得结果不是一般，所以要重新确定，一段段设计引物扩增。

谢谢你的建议
回复此楼
7楼2012-04-10 17:06:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzh860801

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-10 18:36:29
lz你的情况和我很相似啊
我是设计的LB的引物 然后调到了载体内部去了
序列比对的时候发现NCBI上面PBI121这个载体有几个修改过的 它们的LB RB是反的 所以我目前把引物反过来设计准备重新调了
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

dfm1987
8楼2012-04-10 17:10:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfm1987

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by lzh860801 at 2012-04-10 17:10:04:
lz你的情况和我很相似啊
我是设计的LB的引物 然后调到了载体内部去了
序列比对的时候发现NCBI上面PBI121这个载体有几个修改过的 它们的LB RB是反的 所以我目前把引物反过来设计准备重新调了

谢谢！但是我扩增的方向好像没有错，是往RB区域以外扩增的，但是得到1000bp左右的RB上游载体序列，没有得到植株基因组的序列
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-14 10:20:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caidan1385

新虫 (初入文坛)
我也遇到同样的问题，tail-pcr第三轮扩增得到的片段只有1000多，还是载体上的，不知道是怎么回事，都快被折腾死了，我现在就想知道RB和LB到底距离边界多远，我用的质粒是 pPK2  其原始质粒是 pPZP201希望好心人帮忙解
赞一下 回复此楼
10楼2013-04-01 22:40:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dfm1987 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +6 一鸭鸭哟 2026-03-14 7/350 2026-03-15 22:12 by Winj1e
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 268求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-14 6/300 2026-03-14 22:20 by 运气yunqi
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:06 by tranquil_ya
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 求调剂，一志愿江南大学环境工程085701 +3 Djdjj12 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:31 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭