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怎样将两个基因共表达？
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| 大家好，怎样将两个基因插入一个表达载体中让其反向表达，并且在载体上另插入一个相同的启动子，大家有没有做过的？能不能说一下大概的思路，谢谢！ |
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 核酸生物学实验经验 | 生物化学和分子生物学 |
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凌波丽
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感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！IRES后面的蛋白的翻译效率有时候不是太高，这也是个问题 2013-07-06 23:05:48
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！IRES后面的蛋白的翻译效率有时候不是太高，这也是个问题 2013-07-06 23:05:48
| 若欲表达两个融合的不同的基因，而且由同一个启动子进行转录，制造出的mRNA会含有两个基因的序列，当翻译第一个基因而碰到终止密码子时，核糖体会从mRNA上掉下来，造成第二个基因无法表达。解决这个问题的方法是，在两个基因间加入一个内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列，让第二个基因可由内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列处进行翻译，如此两个基因就可以同时被翻译，制造出不同的蛋白质。 |
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5747593504楼2013-07-06 22:57:45
gyesang
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2楼2013-07-06 19:18:56
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gyesang: 金币+2, 其实这种表达要分原核还是真核表达，真核有IRES，2A连接子等，原核表达可以借鉴pDual系列的载体设计 2013-07-06 23:04:43
574759350: 金币+5, ★有帮助 2013-07-07 09:14:01
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gyesang: 金币+2, 其实这种表达要分原核还是真核表达，真核有IRES，2A连接子等，原核表达可以借鉴pDual系列的载体设计 2013-07-06 23:04:43
574759350: 金币+5, ★有帮助 2013-07-07 09:14:01
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理论上是可行的。常见的比较典型的例子是在同一个载体上表达抗体的重链和轻链基因。如质粒pComb3 （原文章：A vector for the expression of recombinant monoclonal Fab fragments in bacteria）。 但你要求两个基因反向表达，有什么特殊原因吗？ 一般来说，如果是两个独立表达的调控单元，基因的方向的影响不太大。 关键是载体的整体设计，做一个切实可行的克隆方案，保证计划的实现。 建议你找一个有较好分子生物学功底的同学帮忙设计。 祝好运！ |
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3楼2013-07-06 22:35:48
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 08:57:44
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 08:57:44
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举两个例子： 1.Purification of GFP fusion proteins from transgenic plant cell cultures http://www.aseanbiotechnology.info/Abstract/21020495.pdf 2.Chaperone-fusion expression plasmid vectors for improved solubility of recombinant proteins in Escherichia coli http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2683908/ |
6楼2013-07-06 23:55:29
7楼2013-07-07 09:12:39
8楼2013-07-07 09:24:15
9楼2013-07-07 09:24:56
gyesang
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这个你可以借鉴商业化载体pETduet-1的设计，图谱见附件 |
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2013-07-07 13:54:23, 596.42 K
10楼2013-07-07 13:54:32
