| 查看: 3179 | 回复: 12 | ||||
[求助]
怎样将两个基因共表达？
|
||||
| 大家好，怎样将两个基因插入一个表达载体中让其反向表达，并且在载体上另插入一个相同的启动子，大家有没有做过的？能不能说一下大概的思路，谢谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 | 生物化学和分子生物学 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有180人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
基因全长及表达
已经有7人回复- 将两个基因串联到启动子下面，两个基因都能表达么？
已经有54人回复
- 多个基因共表达纯化问题
已经有15人回复
- 基因过表达中目的片段问题？？？
已经有17人回复
- 如何查找一个基因的差异表达
已经有3人回复
- 同时表达两种蛋白表达问题
已经有3人回复
- 两个基因融合构建真核表达载体需要去掉信号肽吗?
已经有7人回复
- 细胞稳定转染，质粒的设计
已经有15人回复
- 基因表达分析怎样做
已经有9人回复
- 两个基因融合不起来
已经有13人回复
- 求助：关于基因表达中调控蛋白和转录调控蛋白的连接和表达
已经有5人回复
- 酶基因表达量高，酶活性就一定高吗？（请大家帮帮忙，谢谢）
已经有12人回复
- 【求助/交流】请教达人：想找出两个细菌中差异表达的基因，有什么成熟且便宜的方法？
已经有31人回复
- 【求助/交流】目的基因连接表达载体后涂板不长菌
已经有11人回复
- 引物设计求助~
已经有13人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！IRES后面的蛋白的翻译效率有时候不是太高，这也是个问题 2013-07-06 23:05:48
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！IRES后面的蛋白的翻译效率有时候不是太高，这也是个问题 2013-07-06 23:05:48
| 若欲表达两个融合的不同的基因，而且由同一个启动子进行转录，制造出的mRNA会含有两个基因的序列，当翻译第一个基因而碰到终止密码子时，核糖体会从mRNA上掉下来，造成第二个基因无法表达。解决这个问题的方法是，在两个基因间加入一个内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列，让第二个基因可由内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)序列处进行翻译，如此两个基因就可以同时被翻译，制造出不同的蛋白质。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5747593504楼2013-07-06 22:57:45
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24326.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2013-07-06 19:18:56
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 其实这种表达要分原核还是真核表达，真核有IRES，2A连接子等，原核表达可以借鉴pDual系列的载体设计 2013-07-06 23:04:43
574759350: 金币+5, ★有帮助 2013-07-07 09:14:01
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 其实这种表达要分原核还是真核表达，真核有IRES，2A连接子等，原核表达可以借鉴pDual系列的载体设计 2013-07-06 23:04:43
574759350: 金币+5, ★有帮助 2013-07-07 09:14:01
|
理论上是可行的。常见的比较典型的例子是在同一个载体上表达抗体的重链和轻链基因。如质粒pComb3 （原文章：A vector for the expression of recombinant monoclonal Fab fragments in bacteria）。 但你要求两个基因反向表达，有什么特殊原因吗？ 一般来说，如果是两个独立表达的调控单元，基因的方向的影响不太大。 关键是载体的整体设计，做一个切实可行的克隆方案，保证计划的实现。 建议你找一个有较好分子生物学功底的同学帮忙设计。 祝好运！ |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2013-07-06 22:35:48
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
5楼2013-07-06 23:37:40
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 08:57:44
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 08:57:44
|
举两个例子： 1.Purification of GFP fusion proteins from transgenic plant cell cultures http://www.aseanbiotechnology.info/Abstract/21020495.pdf 2.Chaperone-fusion expression plasmid vectors for improved solubility of recombinant proteins in Escherichia coli http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2683908/ |
6楼2013-07-06 23:55:29
7楼2013-07-07 09:12:39
8楼2013-07-07 09:24:15
9楼2013-07-07 09:24:56
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24326.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
|
这个你可以借鉴商业化载体pETduet-1的设计，图谱见附件 |
» 本帖附件资源列表
-
欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : pETDuet1.pdf
2013-07-07 13:54:23, 596.42 K
10楼2013-07-07 13:54:32