| 查看: 1348 | 回复: 15 | ||
[求助]
多个基因共表达纯化问题
|
||
|
请教共表达两个基因以及表达后如何纯化。具体为 两个基因都有完整阅读框，之间加有rbs，如何连接到pet28，能实现共表达吗？ 另外，就是如果共表达了，第一个蛋白可以利用载体的His标签纯化，那第二个也能纯化吗？如果不能，是不是应该在它前面加上His标签呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有280人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
基因克隆表达中信号肽的问题
已经有11人回复- 线粒体基因控制区CR含重复序列，为什么PCR产物直接测序不准，而要纯化或者克隆再测序
已经有12人回复
- 关于基因超表达的影响
已经有5人回复
- 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀
已经有10人回复
- 相对定量测基因相对表达量，急啊！！！
已经有4人回复
- 知道一个基因在花中表达量高有什么用？
已经有13人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 求助：关于基因表达调控机制的问题
已经有9人回复
- 【Journal Club】第3讲 水稻全基因组基因网络生物信息学平台的建立
已经有33人回复
- 关于基因表达量下调的问题
已经有3人回复
- 真核生物基因在大肠中表达 问题
已经有4人回复
- 诚招有分子生物学及蛋白质表达纯化背景的博士一年级同学到美国来做抗体engineering
已经有16人回复
- 【求助/交流】原核表达羊基因，cDNA长度约为3kb，基因为一种有活性的酶
已经有15人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- 【求助/交流】有关蛋白纯化及其基因克隆的问题！请大家帮助！
已经有10人回复
- 引物设计求助~
已经有13人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
xiangquanju
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1519.7
- 散金: 245
- 红花: 1
- 帖子: 295
- 在线: 153.2小时
- 虫号: 999190
- 注册: 2010-04-17
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
12楼2012-12-03 13:18:01
2楼2012-11-29 11:43:58
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 15:04:35
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 20:47:18
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:35:52
感谢参与，应助指数 +1
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 15:04:35
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 20:47:18
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:35:52
|
1、连接的话，先连接A基因到pet28，B基因借助另外一个载体，连接后，扩增RBS-B基因进行第二次连接； 2、T7启动子共表达两个基因没问题。 3、共表达主要是做催化用的，做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好？ 如果确实像同时纯化也行，在扩增第二个基因的引物上加上his标签就行。 |
3楼2012-11-29 13:55:08
4楼2012-11-29 15:04:24
5楼2012-11-29 15:12:45
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4738.3
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2308
- 在线: 740.7小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
6楼2012-11-29 15:57:17
7楼2012-11-29 20:46:27
xiangquanju
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1519.7
- 散金: 245
- 红花: 1
- 帖子: 295
- 在线: 153.2小时
- 虫号: 999190
- 注册: 2010-04-17
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:22:19
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:36:05
感谢参与，应助指数 +1
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-12-02 09:22:19
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:36:05
|
首先楼主要明白共表达的目的是什么，有些是为了研究蛋白之间的相互作用，有些是为了保证蛋白的正确折叠，需要供表达另外一个蛋白 共表达可以选择共表达载体（progema公司有很多），把不同的基因插入到不同的多克隆位点。一般只会在其中一个基因上插入一个纯化标签，然后通过蛋白质之间的相互作用纯化将另外一个蛋白也纯化了。 如果楼主担心标签最蛋白的活性有影响，可以在蛋白与标签之间加入一个蛋白酶酶切位点，如TEV，纯化之后用这个蛋白酶切除标签就可以了 |
8楼2012-12-01 20:42:49
9楼2012-12-02 09:27:54
xiangquanju
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1519.7
- 散金: 245
- 红花: 1
- 帖子: 295
- 在线: 153.2小时
- 虫号: 999190
- 注册: 2010-04-17
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
10楼2012-12-02 10:33:57