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多个基因共表达纯化问题
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请教共表达两个基因以及表达后如何纯化。具体为 两个基因都有完整阅读框，之间加有rbs，如何连接到pet28，能实现共表达吗？ 另外，就是如果共表达了，第一个蛋白可以利用载体的His标签纯化，那第二个也能纯化吗？如果不能，是不是应该在它前面加上His标签呢？ |
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1、连接的话，先连接A基因到pet28，B基因借助另外一个载体，连接后，扩增RBS-B基因进行第二次连接； 2、T7启动子共表达两个基因没问题。 3、共表达主要是做催化用的，做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好？ 如果确实像同时纯化也行，在扩增第二个基因的引物上加上his标签就行。 |
3楼2012-11-29 13:55:08
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首先楼主要明白共表达的目的是什么，有些是为了研究蛋白之间的相互作用，有些是为了保证蛋白的正确折叠，需要供表达另外一个蛋白 共表达可以选择共表达载体（progema公司有很多），把不同的基因插入到不同的多克隆位点。一般只会在其中一个基因上插入一个纯化标签，然后通过蛋白质之间的相互作用纯化将另外一个蛋白也纯化了。 如果楼主担心标签最蛋白的活性有影响，可以在蛋白与标签之间加入一个蛋白酶酶切位点，如TEV，纯化之后用这个蛋白酶切除标签就可以了 |
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