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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多个基因共表达纯化问题
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coh2lxx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xiangquanju at 2012-12-02 10:33:57
Progema有很多共表达的载体，一个载体有两个多克隆位点，所以你可以在一个载体上表达两个基因...

如果我想用一个启动子，把两个基因串联共表达，怎么设计
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11楼2012-12-02 12:56:59
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 欢迎多多交流 2012-12-03 16:36:25
引用回帖:
11楼: Originally posted by coh2lxx at 2012-12-02 12:56:59
如果我想用一个启动子，把两个基因串联共表达，怎么设计...

你的意思是把两个基因放在一个克隆位点里面？
如果这这样的话，可以通过在引物上加限制性内切酶来完成，也就是说放在前面的基因的下游引物和放在后面的上游引物的酶切位点一样，先把其中一个基因出入到多克隆位点区，再插入第二个！
我之前有这样做过和GST的共表达，把GST放后面的，但是最后表达出来的大部分都是GST,要么都是包涵体，听一个师兄说因为两个基因挨得太近，可能需要在两个基因之间加一个linker，但是具体这个linker怎么加，我也不是很清楚
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12楼2012-12-03 13:18:01
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coh2lxx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by xiangquanju at 2012-12-03 13:18:01
你的意思是把两个基因放在一个克隆位点里面？
如果这这样的话，可以通过在引物上加限制性内切酶来完成，也就是说放在前面的基因的下游引物和放在后面的上游引物的酶切位点一样，先把其中一个基因出入到多克隆位点 ...

谢谢，我准备尝试一下用linker连接。不知结果会怎样。。。。。。。
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13楼2012-12-05 12:43:18
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by coh2lxx at 2012-12-05 12:43:18
谢谢，我准备尝试一下用linker连接。不知结果会怎样。。。。。。。...

好的，Good luck!
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14楼2012-12-05 15:16:25
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天蛇2012

新虫 (初入文坛)
你是要做两个蛋白的共表达吗？你可以选取两个启动子的载体，然后分别插入。也可以加入linker
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15楼2012-12-05 17:19:21
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coh2lxx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 天蛇2012 at 2012-12-05 17:19:21
你是要做两个蛋白的共表达吗？你可以选取两个启动子的载体，然后分别插入。也可以加入linker

谢谢您！！正在尝试。
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16楼2012-12-07 08:36:48
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