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coh2lxx

银虫 (小有名气)

[求助] 多个基因共表达纯化问题

请教共表达两个基因以及表达后如何纯化。具体为
两个基因都有完整阅读框,之间加有rbs,如何连接到pet28,能实现共表达吗?
另外,就是如果共表达了,第一个蛋白可以利用载体的His标签纯化,那第二个也能纯化吗?如果不能,是不是应该在它前面加上His标签呢?
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 欢迎多多交流 2012-12-03 16:36:25
引用回帖:
11楼: Originally posted by coh2lxx at 2012-12-02 12:56:59
如果我想用一个启动子,把两个基因串联共表达,怎么设计...

你的意思是把两个基因放在一个克隆位点里面?
如果这这样的话,可以通过在引物上加限制性内切酶来完成,也就是说放在前面的基因的下游引物和放在后面的上游引物的酶切位点一样,先把其中一个基因出入到多克隆位点区,再插入第二个!
我之前有这样做过和GST的共表达,把GST放后面的,但是最后表达出来的大部分都是GST,要么都是包涵体,听一个师兄说因为两个基因挨得太近,可能需要在两个基因之间加一个linker,但是具体这个linker怎么加,我也不是很清楚
12楼2012-12-03 13:18:01
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coh2lxx

银虫 (小有名气)

自己顶一下,有懂的大侠帮帮忙!!!
2楼2012-11-29 11:43:58
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 15:04:35
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 20:47:18
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:35:52
1、连接的话,先连接A基因到pet28,B基因借助另外一个载体,连接后,扩增RBS-B基因进行第二次连接;
2、T7启动子共表达两个基因没问题。
3、共表达主要是做催化用的,做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好?
如果确实像同时纯化也行,在扩增第二个基因的引物上加上his标签就行。
Thank-you,so-blue.
3楼2012-11-29 13:55:08
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coh2lxx

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-11-29 13:55:08
1、连接的话,先连接A基因到pet28,B基因借助另外一个载体,连接后,扩增RBS-B基因进行第二次连接;
2、T7启动子共表达两个基因没问题。
3、共表达主要是做催化用的,做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好 ...

谢谢您的建议。
4楼2012-11-29 15:04:24
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