5楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-09-03 19:57:54
还有一个问题就是以pet24为例，有关转录起始和终止位点，翻译起始和终止位点。
1.转录肯定是从T7 promoter那儿开始的吧？
2.那转录有终止吗？细菌好像是单顺反子吧？
3。翻译是在Nde Ⅰ那儿的ATG开始吧？我如果 ...

7楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-09-04 08:43:38
还有几点不明白：
1.如果我的插入片段不带TAA，那是在His-tag后面的TGA那儿终止还是T7 terminator的TAA那儿终止？
2.两种起始密码子GTG，ATG，三种终止密码子TAA，TAG，TGA密码子都能在pet载体中在BL21中被正确起 ...

2楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-02 22:08:03
信号肽最好是去掉，因为带有信号肽表达不了，但是也有些个别例子就行。我以前就做过对照，去和没去的都做出来了，但是只有那么一个特例，其他的都不行。你是研究蛋白的活性，去掉信号肽后直接克隆到pet系列的载体上 ...

4楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-09-03 10:01:37
1、信号肽最好去掉，没有去掉的话很大的可能表达出来是没有活力的，因为宿主不能识别这个信号肽序列，不会把信号肽切割，表达出来的是带信号肽的蛋白，不是你要的成熟蛋白，对活性一般是有影响的。
2、不一定要选择 ...

6楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-09-03 20:42:39
1、转录肯定是从T7 promoter那儿开始。
2、转录有终止，T7 terminator。
3、翻译是是从Nde Ⅰ那儿的ATG开始，在BamH Ⅰ和Xh Ⅰ之间插入，即使ATG也是从Nde Ⅰ那儿的ATG开始翻译。
4、在BamH Ⅰ和Xh Ⅰ之间插入一 ...

8楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-09-04 09:22:43
1、His-tag后面的TGA那儿终止。
2、起始密码子一般用ATG，三种终止密码子TAA，TAG，TGA都行，TAA用得多的点，TAG用得最少。
3、多一两个氨基酸一般影响不大的，要得到成熟肽采取的策略就是你说的融合其他标签后切 ...

9楼: Originally posted by tzaixmc at 2012-09-04 15:06:56
是不是只有pGEX系列的载体能实现先融合再切掉标签啊...