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coh2lxx

银虫 (小有名气)

[求助] 多个基因共表达纯化问题

请教共表达两个基因以及表达后如何纯化。具体为
两个基因都有完整阅读框,之间加有rbs,如何连接到pet28,能实现共表达吗?
另外,就是如果共表达了,第一个蛋白可以利用载体的His标签纯化,那第二个也能纯化吗?如果不能,是不是应该在它前面加上His标签呢?
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by coh2lxx at 2012-12-02 09:27:54
谢谢,我应该是想研究
两个蛋白对底物降解是否有协同,
以及协同的可能机制,
另外,还想研究这两个基因如何共表达(一个启动子,还是两个启动子,两个基因的前后顺序),对底物降解效果最好
所以是不是要将同 ...

Progema有很多共表达的载体,一个载体有两个多克隆位点,所以你可以在一个载体上表达两个基因
10楼2012-12-02 10:33:57
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查看全部 16 个回答

coh2lxx

银虫 (小有名气)

自己顶一下,有懂的大侠帮帮忙!!!
2楼2012-11-29 11:43:58
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 15:04:35
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 20:47:18
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:35:52
1、连接的话,先连接A基因到pet28,B基因借助另外一个载体,连接后,扩增RBS-B基因进行第二次连接;
2、T7启动子共表达两个基因没问题。
3、共表达主要是做催化用的,做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好?
如果确实像同时纯化也行,在扩增第二个基因的引物上加上his标签就行。
Thank-you,so-blue.
3楼2012-11-29 13:55:08
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coh2lxx

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-11-29 13:55:08
1、连接的话,先连接A基因到pet28,B基因借助另外一个载体,连接后,扩增RBS-B基因进行第二次连接;
2、T7启动子共表达两个基因没问题。
3、共表达主要是做催化用的,做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好 ...

谢谢您的建议。
4楼2012-11-29 15:04:24
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