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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多个基因共表达纯化问题
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coh2lxx

银虫 (小有名气)

[求助] 多个基因共表达纯化问题

请教共表达两个基因以及表达后如何纯化。具体为
两个基因都有完整阅读框，之间加有rbs，如何连接到pet28，能实现共表达吗？
另外，就是如果共表达了，第一个蛋白可以利用载体的His标签纯化，那第二个也能纯化吗？如果不能，是不是应该在它前面加上His标签呢？
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1楼 2012-11-29 11:38:34
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coh2lxx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by xiangquanju at 2012-12-01 20:42:49
首先楼主要明白共表达的目的是什么，有些是为了研究蛋白之间的相互作用，有些是为了保证蛋白的正确折叠，需要供表达另外一个蛋白
共表达可以选择共表达载体（progema公司有很多），把不同的基因插入到不同的多克隆 ...

谢谢，我应该是想研究
两个蛋白对底物降解是否有协同，
以及协同的可能机制，
另外，还想研究这两个基因如何共表达（一个启动子，还是两个启动子，两个基因的前后顺序），对底物降解效果最好
所以是不是要将同一个载体上的蛋白纯化出来
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9楼2012-12-02 09:27:54
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coh2lxx

银虫 (小有名气)
自己顶一下，有懂的大侠帮帮忙！！！
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2楼2012-11-29 11:43:58
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 15:04:35
coh2lxx: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-29 20:47:18
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-12-03 16:35:52
1、连接的话，先连接A基因到pet28，B基因借助另外一个载体，连接后，扩增RBS-B基因进行第二次连接；
2、T7启动子共表达两个基因没问题。
3、共表达主要是做催化用的，做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好？
如果确实像同时纯化也行，在扩增第二个基因的引物上加上his标签就行。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-11-29 13:55:08
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coh2lxx

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by susizheng at 2012-11-29 13:55:08
1、连接的话，先连接A基因到pet28，B基因借助另外一个载体，连接后，扩增RBS-B基因进行第二次连接；
2、T7启动子共表达两个基因没问题。
3、共表达主要是做催化用的，做纯化没必要共表达吧。分开表达纯化不是更好 ...

谢谢您的建议。
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4楼2012-11-29 15:04:24
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