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gx0406

铜虫 (小有名气)

[交流] 基因过表达中目的片段问题？？？

游离过表达谷氨酸棒状杆菌中某个基因a，分别从野生菌株、亚适量生产菌株和温敏型生产菌株（二者从野生菌诱变而来）中p到目的基因，基因测序比对三者序列完全一样。请问我过表达时选择哪个来源的目的基因较好，是都一样还是？貌似基因序列一样时，蛋白的空间结构可能有变化，毕竟原始菌株和诱导所得的突变菌株在使用时基因a编码的蛋白酶活不一样。
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1楼 2012-11-12 08:33:10
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竹子小小

木虫 (小有名气)
★
gx0406(金币+1): 谢谢参与
序列一样就是一样的，你都把基因从原来的环境提出来了，还想他原来的酶一不一样干什么。
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2楼2012-11-12 09:39:52
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★
gx0406(金币+1): 谢谢参与
这个没有关系的吧，你现在得到的东西既然序列都完全一致了
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3楼2012-11-12 10:01:17
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gx0406

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-12 09:39:52
序列一样就是一样的，你都把基因从原来的环境提出来了，还想他原来的酶一不一样干什么。

嗯，这样说对不对？：只要基因的序列完全一样，在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白（酶）空间构象就一样，只是由于两种菌的代谢强弱等不同，酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因，所以考虑直接用野生菌的片段还是分别用两个生产菌自己的片段？？

[ Last edited by gx0406 on 2012-11-12 at 11:37 ]
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4楼2012-11-12 11:29:30
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gx0406

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-12 10:01:17
这个没有关系的吧，你现在得到的东西既然序列都完全一致了

嗯，这样说对不对？：只要基因的序列完全一样，在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白（酶）空间构象就一样，只是由于两种菌的代谢强弱等不同，酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因，所以考虑直接用野生菌的片段还是分别用两个生产菌自己的片段？？
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5楼2012-11-12 11:31:12
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wangqi20092

新虫 (小有名气)
★
gx0406(金币+1): 谢谢参与
应该完全一样，哪个都行。
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6楼2012-11-12 11:40:52
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hongqifei

木虫 (小有名气)
★
gx0406(金币+1): 谢谢参与
这说明突变株的突变并不在基因a中，也许是在a的启动子中影响其表达量，也许是在相关通路的其他基因中。
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7楼2012-11-12 12:04:20
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竹子小小

木虫 (小有名气)
★
gx0406(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
4楼: Originally posted by gx0406 at 2012-11-12 11:29:30
嗯，这样说对不对？：只要基因的序列完全一样，在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白（酶）空间构象就一样，只是由于两种菌的代谢强弱等不同，酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因，所以 ...

序列一样用哪个都行，但你选的生产菌一定会影响他的表达。与序列的来源无关，哪怕你的序列是人工合成的和你自己P的也没有区别。
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8楼2012-11-12 13:28:52
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)
★
gx0406(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by gx0406 at 2012-11-12 11:31:12
嗯，这样说对不对？：只要基因的序列完全一样，在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白（酶）空间构象就一样，只是由于两种菌的代谢强弱等不同，酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因，所以考虑 ...

这个和你的片段没有关系的，只是与你选择的载体有关的吧
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9楼2012-11-12 14:24:13
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gx0406

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-12 13:28:52
序列一样用哪个都行，但你选的生产菌一定会影响他的表达。与序列的来源无关，哪怕你的序列是人工合成的和你自己P的也没有区别。...

我之前是考虑，在三种不同的菌中，菌的代谢强弱等环境不同，可能原始的的酶空间构象就有差别，导致酶活不同，这样取不同的片段过表达后，效果是不一样的。
按照你说的，意思就是：不管目的基因的来源是哪株菌，只要序列没有突变（不考虑启动子的序列，都用质粒上带的启动子），用哪个都一样（即三个片段在同一种菌中过表达，在条件一样的情况下，酶活都一样）；只是过表达后，在不同的菌种目的基因编码的酶所表现出来的酶活不同而已。是否可以这样理解

[ Last edited by gx0406 on 2012-11-12 at 21:32 ]
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15楼2012-11-12 20:30:31
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竹子小小

木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by gx0406 at 2012-11-12 20:30:31
我之前是考虑，在三种不同的菌中，菌的代谢强弱等环境不同，可能原始的的酶空间构象就有差别，导致酶活不同，这样取不同的片段过表达后，效果是不一样的。
按照你说的，意思就是：不管目的基因的来源是哪株菌 ...

对的
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16楼2012-11-13 11:08:30
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gx0406

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-13 11:08:30
对的...

好，多谢了
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17楼2012-11-14 08:52:45
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gx0406

铜虫 (小有名气)
好，多谢了
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18楼2012-11-14 08:53:17
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yingying158810楼
2012-11-12 20:05   回复  
gx0406(金币+1): 谢谢参与
yingying158811楼
2012-11-12 20:05   回复  
gx0406(金币+1): 谢谢参与
yingying158812楼
2012-11-12 20:05   回复  
gx0406(金币+1): 谢谢参与
yingying158813楼
2012-11-12 20:05   回复  
lilyjun14楼
2012-11-12 20:09   回复  
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