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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gx0406

铜虫 (小有名气)


[交流] 基因过表达中目的片段问题???

游离过表达谷氨酸棒状杆菌中某个基因a,分别从野生菌株、亚适量生产菌株和温敏型生产菌株(二者从野生菌诱变而来)中p到目的基因,基因测序比对三者序列完全一样。请问我过表达时选择哪个来源的目的基因较好,是都一样还是?貌似基因序列一样时,蛋白的空间结构可能有变化,毕竟原始菌株和诱导所得的突变菌株在使用时基因a编码的蛋白酶活不一样。
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竹子小小

木虫 (小有名气)



gx0406(金币+1): 谢谢参与
序列一样就是一样的,你都把基因从原来的环境提出来了,还想他原来的酶一不一样干什么。
2楼2012-11-12 09:39:52
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)



gx0406(金币+1): 谢谢参与
这个没有关系的吧,你现在得到的东西既然序列都完全一致了
3楼2012-11-12 10:01:17
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gx0406

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-12 09:39:52
序列一样就是一样的,你都把基因从原来的环境提出来了,还想他原来的酶一不一样干什么。

嗯,这样说对不对?:只要基因的序列完全一样,在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白(酶)空间构象就一样,只是由于两种菌的代谢强弱等不同,酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因,所以考虑直接用野生菌的片段还是分别用两个生产菌自己的片段??

[ Last edited by gx0406 on 2012-11-12 at 11:37 ]
4楼2012-11-12 11:29:30
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gx0406

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 静安jingan at 2012-11-12 10:01:17
这个没有关系的吧,你现在得到的东西既然序列都完全一致了

嗯,这样说对不对?:只要基因的序列完全一样,在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白(酶)空间构象就一样,只是由于两种菌的代谢强弱等不同,酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因,所以考虑直接用野生菌的片段还是分别用两个生产菌自己的片段??
5楼2012-11-12 11:31:12
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wangqi20092

新虫 (小有名气)



gx0406(金币+1): 谢谢参与
应该完全一样,哪个都行。
6楼2012-11-12 11:40:52
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hongqifei

木虫 (小有名气)



gx0406(金币+1): 谢谢参与
这说明突变株的突变并不在基因a中,也许是在a的启动子中影响其表达量,也许是在相关通路的其他基因中。
7楼2012-11-12 12:04:20
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竹子小小

木虫 (小有名气)



gx0406(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
4楼: Originally posted by gx0406 at 2012-11-12 11:29:30
嗯,这样说对不对?:只要基因的序列完全一样,在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白(酶)空间构象就一样,只是由于两种菌的代谢强弱等不同,酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因,所以 ...

序列一样用哪个都行,但你选的生产菌一定会影响他的表达。与序列的来源无关,哪怕你的序列是人工合成的和你自己P的也没有区别。
8楼2012-11-12 13:28:52
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)



gx0406(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
5楼: Originally posted by gx0406 at 2012-11-12 11:31:12
嗯,这样说对不对?:只要基因的序列完全一样,在野生菌和诱导后的生产菌中对应的蛋白(酶)空间构象就一样,只是由于两种菌的代谢强弱等不同,酶活可能不同。我准备在这两个生产菌中过表达这个目的基因,所以考虑 ...

这个和你的片段没有关系的,只是与你选择的载体有关的吧
9楼2012-11-12 14:24:13
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gx0406

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
8楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-12 13:28:52
序列一样用哪个都行,但你选的生产菌一定会影响他的表达。与序列的来源无关,哪怕你的序列是人工合成的和你自己P的也没有区别。...

我之前是考虑,在三种不同的菌中,菌的代谢强弱等环境不同,可能原始的的酶空间构象就有差别,导致酶活不同,这样取不同的片段过表达后,效果是不一样的。
按照你说的,意思就是:不管目的基因的来源是哪株菌,只要序列没有突变(不考虑启动子的序列,都用质粒上带的启动子),用哪个都一样(即三个片段在同一种菌中过表达,在条件一样的情况下,酶活都一样);只是过表达后,在不同的菌种目的基因编码的酶所表现出来的酶活不同而已。是否可以这样理解

[ Last edited by gx0406 on 2012-11-12 at 21:32 ]
15楼2012-11-12 20:30:31
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竹子小小

木虫 (小有名气)


引用回帖:
15楼: Originally posted by gx0406 at 2012-11-12 20:30:31
我之前是考虑,在三种不同的菌中,菌的代谢强弱等环境不同,可能原始的的酶空间构象就有差别,导致酶活不同,这样取不同的片段过表达后,效果是不一样的。
按照你说的,意思就是:不管目的基因的来源是哪株菌 ...

对的
16楼2012-11-13 11:08:30
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gx0406

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
16楼: Originally posted by 竹子小小 at 2012-11-13 11:08:30
对的...

好,多谢了
17楼2012-11-14 08:52:45
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gx0406

铜虫 (小有名气)


好,多谢了
18楼2012-11-14 08:53:17
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简单回复
2012-11-12 20:05   回复  
gx0406(金币+1): 谢谢参与
2012-11-12 20:05   回复  
gx0406(金币+1): 谢谢参与
2012-11-12 20:05   回复  
gx0406(金币+1): 谢谢参与
2012-11-12 20:05   回复  
lilyjun14楼
2012-11-12 20:09   回复  
gx0406(金币+1): 谢谢参与
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