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Aunbis

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达系统HBV的S抗原不能表达目的蛋白 已有2人参与

我用的是PET 表达系统
1.开始采用PET28a载体连接目的基因表达,在BL21中没有检测到表达
2.更换菌株为rosetta,仍然没有表达
3.后来获得了PET21a载体,该载体上在NdeI及XhoI中连接了RFP片段,同时将我的片段连接到PET21a上,依旧没有表达,但是同条件下的RFP片段可以表达(两个菌株都可以)
4.PS:质粒测序没有问题,另外我的其中几个样品为A-B-C-B 的序列,这样的重复序列会不会导致不表达?
5.我的其中一个对照组为HBV的S抗原(600bp)表达后大约有200个aa,但是这个也没有表达
请问做过的同学可以帮忙分析下可能的原因和解决方案
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xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你确定开放阅读框架正确?
Neversaygoodbye
2楼2014-04-19 22:04:10
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Aunbis

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xuejunwang at 2014-04-19 22:04:10
你确定开放阅读框架正确?

确定的,没有错误的
文献
3楼2014-04-21 17:25:46
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lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by Aunbis at 2014-04-21 17:25:46
确定的,没有错误的...

你好,请问设计两端带有酶切位点的引物是根据ORF设计吗?我现在知道目的基因的CDS序列,是不是哪个ORF序列长用哪个?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2014-05-01 11:05:51
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)


Aunbis(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 21:04:44
本帖内容被屏蔽

5楼2014-06-14 09:07:03
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