| 查看: 3698 | 回复: 18 | ||
[求助]
原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办
|
||
各位虫虫好，我最近在做原核表达蛋白，用的标签是HIS-tag，发现标签无论是在N端还是在C端，蛋白折叠时都把它折进去了，纯化不了。我现在想的是是不是可以让蛋白什么标签都不带，按分子量去分。我的方向本来是电化学的，分子方面的很多都不懂，下一步不知道肿么办，求虫虫指点。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有199人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达 蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊
已经有12人回复
- 原核表达后蛋白跑SDS-PAGE细节问题
已经有3人回复
- 请问原核细菌蛋白能否在真核细胞中表达？
已经有8人回复
- CDS的3'端对应蛋白质的N端还是C端？
已经有3人回复
- 原核表达载体蛋白诱导
已经有18人回复
- 原核表达蛋白分子量大小
已经有13人回复
- 表达蛋白折叠不正确会有活性麽？
已经有15人回复
- 如何蛋白原核表达，并去掉第一个氨基酸met
已经有9人回复
- 原核表达蛋白变小
已经有4人回复
- 原核表达中目的蛋白不明确
已经有7人回复
- 蛋白激酶原核表达
已经有14人回复
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 如果蛋白序列N或者C末端多了6个组氨酸，怎么分析蛋白结构呢？
已经有4人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- pet30a原核表达蛋白大小问题
已经有4人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 利用原核表达的蛋白表达量怎么越来越低了
已经有3人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 原核表达系统不表达目的蛋白
已经有8人回复
- 原核同时表达两个蛋白，需要自行给其中一个加标签，请教了！！！
已经有4人回复
- 【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白
已经有15人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大
已经有17人回复
- 原核表达蛋白降解 有效期到2010.8.5
已经有10人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
bullfrog325
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 193 (高中生)
- 金币: 2880.3
- 散金: 200
- 红花: 24
- 帖子: 744
- 在线: 269.5小时
- 虫号: 1864929
- 注册: 2012-06-20
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-07-31 18:50:52
amisking: 金币+3, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-07-31 18:51:10
蛋炒饭1989: 金币+5 2013-08-01 20:24:54
蛋炒饭1989: 金币+4 2013-08-01 20:28:06
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-07-31 18:50:52
amisking: 金币+3, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-07-31 18:51:10
蛋炒饭1989: 金币+5 2013-08-01 20:24:54
蛋炒饭1989: 金币+4 2013-08-01 20:28:06
|
我想到4个办法: 办法1: 把发HIS换成GST, 因为GST自己有结构, 缺点是对目标蛋白的功能结构可能有破坏性的影响. 办法2: 在HIS和目标蛋白之间加linker, 比方说GGSGGSGGS, 使得HIS和目标蛋白的距离疏远些从而有机会不被折叠到内部, 缺点同上, 但是可能性小. 办法3: 研究蛋白的3级结构(有类似的蛋白晶体发表再好不过了), 把HIS放在目标蛋白中间某个位置, 而这个位置是暴露在外的. 办法4: 先用尿素对蛋白变性, 纯化后再复性. 办法2和3需要用mutagenesis办法实现, 楼主可以很容易在网上查到相关内容. 祝楼主成功  |
9楼2013-07-31 17:48:00
bleach060452
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 969.9
- 散金: 15
- 红花: 4
- 帖子: 201
- 在线: 88.2小时
- 虫号: 1004577
- 注册: 2010-04-24
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2013-07-31 11:43:14
3楼2013-07-31 12:10:54
4楼2013-07-31 12:26:37
5楼2013-07-31 12:27:32
roomofxw
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2882.1
- 散金: 69
- 红花: 7
- 帖子: 755
- 在线: 1020小时
- 虫号: 812203
- 注册: 2009-07-20
- 专业: 生物化学
6楼2013-07-31 14:34:03
7楼2013-07-31 16:12:04
8楼2013-07-31 17:30:12
10楼2013-07-31 19:05:23