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原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办
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各位虫虫好，我最近在做原核表达蛋白，用的标签是HIS-tag，发现标签无论是在N端还是在C端，蛋白折叠时都把它折进去了，纯化不了。我现在想的是是不是可以让蛋白什么标签都不带，按分子量去分。我的方向本来是电化学的，分子方面的很多都不懂，下一步不知道肿么办，求虫虫指点。 |
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bullfrog325
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蛋炒饭1989: 金币+4 2013-08-01 20:28:06
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我想到4个办法: 办法1: 把发HIS换成GST, 因为GST自己有结构, 缺点是对目标蛋白的功能结构可能有破坏性的影响. 办法2: 在HIS和目标蛋白之间加linker, 比方说GGSGGSGGS, 使得HIS和目标蛋白的距离疏远些从而有机会不被折叠到内部, 缺点同上, 但是可能性小. 办法3: 研究蛋白的3级结构(有类似的蛋白晶体发表再好不过了), 把HIS放在目标蛋白中间某个位置, 而这个位置是暴露在外的. 办法4: 先用尿素对蛋白变性, 纯化后再复性. 办法2和3需要用mutagenesis办法实现, 楼主可以很容易在网上查到相关内容. 祝楼主成功  |
9楼2013-07-31 17:48:00
bleach060452
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roomofxw
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