24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

蛋炒饭1989

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 391.2
散金: 430
红花: 4
帖子: 188
在线: 155.1小时
虫号: 1509777
注册: 2011-11-25
性别: MM
专业: 电化学分析

[求助] 原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办

各位虫虫好，我最近在做原核表达蛋白，用的标签是HIS-tag，发现标签无论是在N端还是在C端，蛋白折叠时都把它折进去了，纯化不了。我现在想的是是不是可以让蛋白什么标签都不带，按分子量去分。我的方向本来是电化学的，分子方面的很多都不懂，下一步不知道肿么办，求虫虫指点。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

春暖花开

1楼 2013-07-31 11:04:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 193 (高中生)
金币: 2880.3
散金: 200
红花: 24
帖子: 744
在线: 269.5小时
虫号: 1864929
注册: 2012-06-20

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2013-07-31 18:50:52
amisking: 金币+3, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-07-31 18:51:10
蛋炒饭1989: 金币+5 2013-08-01 20:24:54
蛋炒饭1989: 金币+4 2013-08-01 20:28:06

我想到4个办法:
办法1: 把发HIS换成GST, 因为GST自己有结构, 缺点是对目标蛋白的功能结构可能有破坏性的影响.
办法2: 在HIS和目标蛋白之间加linker, 比方说GGSGGSGGS, 使得HIS和目标蛋白的距离疏远些从而有机会不被折叠到内部, 缺点同上, 但是可能性小.
办法3: 研究蛋白的3级结构(有类似的蛋白晶体发表再好不过了), 把HIS放在目标蛋白中间某个位置, 而这个位置是暴露在外的.
办法4: 先用尿素对蛋白变性, 纯化后再复性.
办法2和3需要用mutagenesis办法实现, 楼主可以很容易在网上查到相关内容. 祝楼主成功