应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答完结子版 » 原核表达蛋白降解 有效期到2010.8.5
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 1923  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 博学EPI ，点击这里进行查看

辉辉集团

银虫 (正式写手)

[交流] 原核表达蛋白降解 有效期到2010.8.5

我在做原核表达时，加了组氨酸标签，然后用镍柱纯化，纯化出来的蛋白跑电泳条带很好，纯度很高，但是用PBS透析掉咪唑，再用聚乙二醇浓缩后，然后再去跑电泳，条带变杂了很多，我怀疑是蛋白降解了，请问各位高手 怎么办  谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-07-19 17:07:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辉辉集团

银虫 (正式写手)
什么情况
回复此楼
2楼2010-07-20 08:24:45
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天煞孤星A
xjxlovelxl:http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=1644147&fpage=1请仔细阅读，欢迎常来有奖版答疑 2010-07-20 12:58:06
3楼2010-07-20 09:14:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

entomology557

铁杆木虫 (知名作家)
已经纯化出来了为什么还要去咪唑啊
赞一下 回复此楼
生物进化基本常识：一定范围内，选择压力越大，要么进化的越快来适应这种压力，或者直接被淘汰。
4楼2010-07-20 13:19:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunrise907

至尊木虫 (著名写手)

至尊木虫
信息不够详细啊，能够给出两次电泳图就好了。

这不一定是降解吧，镍柱纯化多少会有一些杂蛋白的，可能在你洗脱液中的浓度比较低，跑胶看不出来，浓缩后浓度变高才看出来了。

可以在纯化的时候加入蛋白酶抑制剂吧，如果还是这样可能就是杂蛋白所致，不放心的话送胶或分子筛分离后样品测个质谱看看吧
赞一下 回复此楼
我就是我，是颜色不一样的烟火，天空海阔，要做最坚强的泡沫。
5楼2010-07-20 14:13:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

andyduan

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2010-07-20 14:40:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辉辉集团

银虫 (正式写手)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by andyduan at 2010-07-20 14:40:00:
你要参考对比目的条带前后的亮度和杂带的对比差别，才可以确定是 不是降解了，也可能是浓缩造成的杂带白富集所以杂蛋白条带比之前亮了

嗯 这个我有考虑过的 但是我采用的浓度是相当的呀 谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2010-07-22 11:41:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辉辉集团

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sunrise907 at 2010-07-20 14:13:16:
信息不够详细啊，能够给出两次电泳图就好了。

这不一定是降解吧，镍柱纯化多少会有一些杂蛋白的，可能在你洗脱液中的浓度比较低，跑胶看不出来，浓缩后浓度变高才看出来了。

可以在纯化的时候加入蛋白酶抑制 ...

我知道肯定会有一定的杂蛋白
但是不可能会这么多啊 我浓度是差不多的呀
而且我还尝试了过了镍柱 再过分子筛的 还是一样啊 会出现那些杂条带
赞一下 回复此楼
8楼2010-07-22 11:42:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunrise907

至尊木虫 (著名写手)

至尊木虫
辉辉集团(金币+10, 博学EPI+1):先谢谢你了 2010-07-23 08:43:23
引用回帖:
Originally posted by 辉辉集团 at 2010-07-22 11:42:49:

我知道肯定会有一定的杂蛋白
但是不可能会这么多啊 我浓度是差不多的呀
而且我还尝试了过了镍柱 再过分子筛的 还是一样啊 会出现那些杂条带

浓缩后的样品在跑胶前稀释了？两次蛋白总量一致的话可能降解了

杂带的位置怎样，分子量大小如何？小的杂带可能是降解了

直接镍柱纯化的样品和浓缩后的样品跑分子筛结果一致？不是的话可能降解了

分子筛的分离样品直接跑胶的吗？直接跑胶和放置一段时间结果不一致可能是降解了

你给的信息还是太少，很难判断的。。

怀疑是降解的话测质谱比对就可以确定了

严格的说蛋白纯化时是应该加蛋白酶抑制剂的，你可以试试

以上，希望有帮助
赞一下 回复此楼
我就是我，是颜色不一样的烟火，天空海阔，要做最坚强的泡沫。
9楼2010-07-22 17:59:48
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

辉辉集团

银虫 (正式写手)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by sunrise907 at 2010-07-22 17:59:48:



浓缩后的样品在跑胶前稀释了？两次蛋白总量一致的话可能降解了

杂带的位置怎样，分子量大小如何？小的杂带可能是降解了

直接镍柱纯化的样品和浓缩后的样品跑分子筛结果一致？不是的话可能降解了

分 ...

嗯 应该是降解了 非常感谢 呵呵
可以告诉我你的QQ不，跟你学习下  呵呵
赞一下 回复此楼
10楼2010-07-23 08:40:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 辉辉集团 的主题更新
111/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿电子科技大学085600材料与化工 329分求调剂 +11 Naiko 2026-04-04 11/550 2026-04-08 14:00 by wutongshun
[考研] 求调剂！生物与医药专硕 +9 逆转陆先生 2026-04-01 10/500 2026-04-08 10:37 by maolC
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 301求调剂 +18 121. 2026-04-04 18/900 2026-04-07 17:49 by 蓝云思雨
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 09:25 by 小黑不怕难
[考研] 一志愿华中农业大学0710（A）初试329分 求调剂 +5 一名26考研生 2026-04-04 5/250 2026-04-07 08:54 by 18828373951
[考研] 一志愿太原理工大学计算机技术专硕348，求调剂指导 +3 nexious 2026-04-05 3/150 2026-04-07 08:19 by jp9609
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 308求调剂 +4 maverick^_^ 2026-04-03 4/200 2026-04-05 19:08 by 蓝云思雨
[考研] 277求调剂 +5 考研调剂lxh 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:03 by chy09050039
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 323分（计算机视觉和大模型项目）能直接上手 +3 chaoxiicy 2026-04-01 3/150 2026-04-05 00:50 by chongya
[考研] 278求调剂 +14 范婷娜 2026-04-04 15/750 2026-04-04 22:15 by lqwchd
[考研] 280求调剂 +21 咕噜晓晓 2026-04-02 22/1100 2026-04-04 11:12 by 猪会飞
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 一志愿346上海大学生物学 +3 上海大学346调剂 2026-04-01 3/150 2026-04-02 08:36 by w虫虫123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭