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辉辉集团

银虫 (正式写手)

[交流] 原核表达蛋白降解 有效期到2010.8.5

我在做原核表达时,加了组氨酸标签,然后用镍柱纯化,纯化出来的蛋白跑电泳条带很好,纯度很高,但是用PBS透析掉咪唑,再用聚乙二醇浓缩后,然后再去跑电泳,条带变杂了很多,我怀疑是蛋白降解了,请问各位高手 怎么办  谢谢!
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entomology557

铁杆木虫 (知名作家)

已经纯化出来了为什么还要去咪唑啊
生物进化基本常识:一定范围内,选择压力越大,要么进化的越快来适应这种压力,或者直接被淘汰。
4楼2010-07-20 13:19:12
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

什么情况
2楼2010-07-20 08:24:45
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sunrise907

至尊木虫 (著名写手)

至尊木虫

信息不够详细啊,能够给出两次电泳图就好了。

这不一定是降解吧,镍柱纯化多少会有一些杂蛋白的,可能在你洗脱液中的浓度比较低,跑胶看不出来,浓缩后浓度变高才看出来了。

可以在纯化的时候加入蛋白酶抑制剂吧,如果还是这样可能就是杂蛋白所致,不放心的话送胶或分子筛分离后样品测个质谱看看吧
我就是我,是颜色不一样的烟火,天空海阔,要做最坚强的泡沫。
5楼2010-07-20 14:13:16
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andyduan

禁虫 (正式写手)

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6楼2010-07-20 14:40:00
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