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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答完结子版 » 原核表达蛋白降解 有效期到2010.8.5
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

[交流] 原核表达蛋白降解 有效期到2010.8.5

我在做原核表达时，加了组氨酸标签，然后用镍柱纯化，纯化出来的蛋白跑电泳条带很好，纯度很高，但是用PBS透析掉咪唑，再用聚乙二醇浓缩后，然后再去跑电泳，条带变杂了很多，我怀疑是蛋白降解了，请问各位高手 怎么办  谢谢！
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1楼 2010-07-19 17:07:08
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sunrise907 at 2010-07-20 14:13:16:
信息不够详细啊，能够给出两次电泳图就好了。

这不一定是降解吧，镍柱纯化多少会有一些杂蛋白的，可能在你洗脱液中的浓度比较低，跑胶看不出来，浓缩后浓度变高才看出来了。

可以在纯化的时候加入蛋白酶抑制 ...

我知道肯定会有一定的杂蛋白
但是不可能会这么多啊 我浓度是差不多的呀
而且我还尝试了过了镍柱 再过分子筛的 还是一样啊 会出现那些杂条带
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8楼2010-07-22 11:42:49
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
什么情况
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2楼2010-07-20 08:24:45
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entomology557

铁杆木虫 (知名作家)
已经纯化出来了为什么还要去咪唑啊
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生物进化基本常识：一定范围内，选择压力越大，要么进化的越快来适应这种压力，或者直接被淘汰。
4楼2010-07-20 13:19:12
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sunrise907

至尊木虫 (著名写手)

至尊木虫
信息不够详细啊，能够给出两次电泳图就好了。

这不一定是降解吧，镍柱纯化多少会有一些杂蛋白的，可能在你洗脱液中的浓度比较低，跑胶看不出来，浓缩后浓度变高才看出来了。

可以在纯化的时候加入蛋白酶抑制剂吧，如果还是这样可能就是杂蛋白所致，不放心的话送胶或分子筛分离后样品测个质谱看看吧
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我就是我，是颜色不一样的烟火，天空海阔，要做最坚强的泡沫。
5楼2010-07-20 14:13:16
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