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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达系统HBV的S抗原不能表达目的蛋白
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Aunbis

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达系统HBV的S抗原不能表达目的蛋白 已有2人参与

我用的是PET 表达系统
1.开始采用PET28a载体连接目的基因表达，在BL21中没有检测到表达
2.更换菌株为rosetta，仍然没有表达
3.后来获得了PET21a载体，该载体上在NdeI及XhoI中连接了RFP片段，同时将我的片段连接到PET21a上，依旧没有表达，但是同条件下的RFP片段可以表达（两个菌株都可以）
4.PS:质粒测序没有问题，另外我的其中几个样品为A-B-C-B 的序列，这样的重复序列会不会导致不表达？
5.我的其中一个对照组为HBV的S抗原（600bp）表达后大约有200个aa，但是这个也没有表达
请问做过的同学可以帮忙分析下可能的原因和解决方案
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1楼 2014-04-16 16:50:40
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xuejunwang

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你确定开放阅读框架正确？
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Neversaygoodbye
2楼2014-04-19 22:04:10
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Aunbis

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuejunwang at 2014-04-19 22:04:10
你确定开放阅读框架正确？

确定的，没有错误的
赞一下 回复此楼
文献
3楼2014-04-21 17:25:46
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lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by Aunbis at 2014-04-21 17:25:46
确定的，没有错误的...

你好，请问设计两端带有酶切位点的引物是根据ORF设计吗？我现在知道目的基因的CDS序列，是不是哪个ORF序列长用哪个？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-01 11:05:51
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★
Aunbis(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-14 21:04:44
本帖内容被屏蔽
5楼2014-06-14 09:07:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
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