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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DH5α能否表达外源蛋白
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zhougama

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1楼 2011-07-15 19:33:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+7, EPI+1): 谢谢热心交流 2011-07-16 09:01:35
可以表达，我用过的我100%确定！

我曾经提取过牛瘤胃内容物的宏基因组DNA，经过回收大片段之后与cosmid载体pWEB:TNC连接，转染大肠杆菌，原本没有带有任何质粒的DH5α，涂板，筛选纤维素酶基因时用的就是活性筛选法，筛选得到内切酶和葡萄糖苷酶若干。淀粉酶我没有筛选，但是师兄筛选得到过。

pWEB:TNC是克隆载体，不是表达载体，但是启动子是大肠杆菌可以识别的，所以表达起来完全没有问题。怕就怕真核生物的基因启动子不识别而已，原核的大概是可以的，虽然很难说是不是全部外源基因都可以表达。

DH5α也是克隆宿主，体内没有外源质粒，更不用说稀有密码子了，但是只要识别了启动子，多少都还是可以表达的。JM系列的克隆宿主也是可以表达的。

只要能识别启动子，应该是无论宿主是那个大肠杆菌菌株都能表达，就是表达出来有没有活性或者被不被降解的问题。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-7-16 at 01:29 ]
赞一下(3人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-07-16 01:13:30
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