应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白
161/2返回列表12下一页
查看: 2095  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cgt713

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白 已有6人参与

目的蛋白的等电点是6.0左右，目的蛋白无纯化标签，我选择GE的CM-Sepharose F.F.进行纯化，pH5.1醋酸缓冲液平衡柱子和上样，然后用pH5.1醋酸缓冲液（内含0-0.5mol/L的NaCl）进行梯度洗脱，通过测定蛋白浓度，跑SDS-PAGE发现我的蛋白回收率特别低，然后我一直不知道我的蛋白跑哪里去了，后来我过完柱子后取一点柱子里的填料来煮样跑SDS-PAGE，发现原来还有很多蛋白(包括目的蛋白和杂蛋白）挂在柱子上，没有下来。我就加大了NaCl的浓度来洗脱，蛋白还是有很多下不来，请大家帮我分析下原因和提供点解决途径 谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-19 09:15:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjnch

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone:可以细致一点 2010-09-19 10:43:01
改pH洗脱好了
回复此楼
2楼2010-09-19 10:42:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cgt713

银虫 (小有名气)

改变pH初步尝试了下 感觉没什么效果

引用回帖:
Originally posted by jjnch at 2010-09-19 10:42:09:
改pH洗脱好了

改变pH初步尝试了下 感觉没什么效果
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-19 10:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把pH再稍微提高一些。

你的明显结合力太强了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-19 11:23:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-09-19 11:23:03:
把pH再稍微提高一些。

你的明显结合力太强了

我也很奇怪呢 怎么结合力会这么强
赞一下 回复此楼
5楼2010-09-19 14:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
或者换Buffer 使用可卡酸钠试试
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-09-19 22:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
0.5M的氯化钠明显太低，我都用过2M的，不过不是你这个层析柱。还有别的层析柱没，有的话去试一下，要是这个问题纠结，等解决了时间都过去了。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2010-09-19 23:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-09-19 23:24:28:
0.5M的氯化钠明显太低，我都用过2M的，不过不是你这个层析柱。还有别的层析柱没，有的话去试一下，要是这个问题纠结，等解决了时间都过去了。

是啊 我加大到2mol/L洗过 还是有很多下不来的哦
赞一下 回复此楼
8楼2010-09-20 09:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cgt713

银虫 (小有名气)

谢谢

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-09-19 22:24:30:
或者换Buffer 使用可卡酸钠试试

这个有什么影响吗/?
赞一下 回复此楼
9楼2010-09-20 09:03:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
尝试吧
不确定能解决问题
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-09-20 09:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cgt713 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +20 koalala 2026-08-24 22/1100 2026-08-24 18:01 by Nano-Firefly
[基金申请] 人气不行了 +9 fansofjerry 2026-08-21 9/450 2026-08-24 17:48 by zhaozhengxin
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +6 图啦图啦 2026-08-24 6/300 2026-08-24 17:44 by 小小红帆
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +5 scalable 2026-08-24 5/250 2026-08-24 17:03 by spiderzhuzhi
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 我面上完蛋了 +8 且听虎啸 2026-08-20 9/450 2026-08-24 13:52 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭