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cgt713

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白 已有6人参与

目的蛋白的等电点是6.0左右,目的蛋白无纯化标签,我选择GE的CM-Sepharose F.F.进行纯化,pH5.1醋酸缓冲液平衡柱子和上样,然后用pH5.1醋酸缓冲液(内含0-0.5mol/L的NaCl)进行梯度洗脱,通过测定蛋白浓度,跑SDS-PAGE发现我的蛋白回收率特别低,然后我一直不知道我的蛋白跑哪里去了,后来我过完柱子后取一点柱子里的填料来煮样跑SDS-PAGE,发现原来还有很多蛋白(包括目的蛋白和杂蛋白)挂在柱子上,没有下来。我就加大了NaCl的浓度来洗脱,蛋白还是有很多下不来,请大家帮我分析下原因和提供点解决途径 谢谢。
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
0.5M的氯化钠明显太低,我都用过2M的,不过不是你这个层析柱。还有别的层析柱没,有的话去试一下,要是这个问题纠结,等解决了时间都过去了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2010-09-19 23:24:28
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