| 查看: 2451 | 回复: 13 | ||||
wqf@126.com银虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化 已有12人参与
|
|
各位大侠： 我做的蛋白等电点是4.3，用PH=7.4的PBS缓冲液作为A液来平衡柱子，该缓冲液不含NaCl，结果出乎意料的是我的蛋白质竟然不能结合到柱子上去，而直接从柱子里穿透出来，这是为什么呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有262人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白纯化遇到问题
已经有22人回复
- 酶的纯化问题
已经有8人回复
- 离子交换层析（deae-纤维素）出峰差异很大（有图谱）
已经有26人回复
- 蛋白质固定吸附与蛋白质分离纯化的区别
已经有9人回复
- 羧甲基纤维素和DEAE纤维素分离蛋白有什么区别？
已经有4人回复
- 使用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化蛋白后杂蛋白的洗脱
已经有7人回复
- 蛋白纯化分离问题
已经有19人回复
微笑漩涡
新虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6.6
- 散金: 232
- 帖子: 1003
- 在线: 87.3小时
- 虫号: 577221
- 注册: 2008-06-22
- 专业: 生物大分子结构与功能
你的蛋白对NaCl敏感么？ 离子强度不够，蛋白挂不上去吧？ 
2楼2011-03-07 15:52:10
wqf@126.com
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 14.6
- 散金: 11
- 红花: 1
- 帖子: 380
- 在线: 501小时
- 虫号: 1099878
- 注册: 2010-09-15
- 性别: GG
- 专业: 波谱分析与成像分析
3楼2011-03-07 16:13:53
4楼2011-03-07 16:38:05
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19499.9
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6591
- 在线: 2780.5小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 19:53:43
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 19:53:43
|
加热是否对目标蛋白质有影响，怎么上柱前不测定？最好每一步都有蛋白质总量和目标蛋白质总量和活性的数据，不然出了问题也不知道在哪里出，或者出了问题还不能及时发现。 阴离子交换层析需要低盐吸附，高盐洗脱，所以平衡液和蛋白质样品的离子浓度都不能高。你的目标蛋白质等电点在4.3，平衡液的pH值为7.4，产生的电荷差距足够吸附有余了，所以不能吸附的原因是蛋白质早就失去活性，怎么测都测不到，或者平衡液和蛋白质样品离子浓度过高，样品没能被吸附就被洗脱。注意过电导率cond%吗？ 无图无真相，如果是用AKTA的，把图截下来发上来。如果是用自动收集仪的，就尽量获得离子强度的测定方法，弄个电导仪。 |
5楼2011-03-07 16:41:24
rhy1027
金虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6353.7
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 370
- 在线: 108.4小时
- 虫号: 509301
- 注册: 2008-02-22
- 专业: 抗体工程学
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 19:53:53
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 19:53:53
|
首先纠正你一个说法，PBS中的S就是sodium的缩写，也就是说你的buffer是PB（即磷酸缓冲液）不是PBS。 你蛋白的等电点是预测出来的吧，一般来说，预测出来的等电点跟实际值相差不会超过1，但你所描述的情况我也遇到过，换做是我的话，就会直接改变纯化方案了，用阴离子柱反穿后，再做阳离子交换试试，当然这中间一定要彻底脱盐了！但你别指望非特异性吸附柱子会给你多纯的东西，后面的步骤就要“因地制宜”了！根据你目的产物的特性，进一步确立纯化方案！多查查文献吧！ |
6楼2011-03-07 16:50:17
7楼2011-03-07 16:51:26
8楼2011-03-07 17:03:49
9楼2011-03-07 21:10:17
tianliudut
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 388.6
- 帖子: 19
- 在线: 24.2小时
- 虫号: 1061944
- 注册: 2010-07-21
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
10楼2011-03-07 21:21:17
