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wqf@126.com银虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化 已有12人参与
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各位大侠： 我做的蛋白等电点是4.3，用PH=7.4的PBS缓冲液作为A液来平衡柱子，该缓冲液不含NaCl，结果出乎意料的是我的蛋白质竟然不能结合到柱子上去，而直接从柱子里穿透出来，这是为什么呢？ |
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你的蛋白对NaCl敏感么？ 离子强度不够，蛋白挂不上去吧？ 
2楼2011-03-07 15:52:10
wqf@126.com
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加热是否对目标蛋白质有影响，怎么上柱前不测定？最好每一步都有蛋白质总量和目标蛋白质总量和活性的数据，不然出了问题也不知道在哪里出，或者出了问题还不能及时发现。 阴离子交换层析需要低盐吸附，高盐洗脱，所以平衡液和蛋白质样品的离子浓度都不能高。你的目标蛋白质等电点在4.3，平衡液的pH值为7.4，产生的电荷差距足够吸附有余了，所以不能吸附的原因是蛋白质早就失去活性，怎么测都测不到，或者平衡液和蛋白质样品离子浓度过高，样品没能被吸附就被洗脱。注意过电导率cond%吗？ 无图无真相，如果是用AKTA的，把图截下来发上来。如果是用自动收集仪的，就尽量获得离子强度的测定方法，弄个电导仪。 |
5楼2011-03-07 16:41:24
rhy1027
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首先纠正你一个说法，PBS中的S就是sodium的缩写，也就是说你的buffer是PB（即磷酸缓冲液）不是PBS。 你蛋白的等电点是预测出来的吧，一般来说，预测出来的等电点跟实际值相差不会超过1，但你所描述的情况我也遇到过，换做是我的话，就会直接改变纯化方案了，用阴离子柱反穿后，再做阳离子交换试试，当然这中间一定要彻底脱盐了！但你别指望非特异性吸附柱子会给你多纯的东西，后面的步骤就要“因地制宜”了！根据你目的产物的特性，进一步确立纯化方案！多查查文献吧！ |
6楼2011-03-07 16:50:17
7楼2011-03-07 16:51:26
8楼2011-03-07 17:03:49
9楼2011-03-07 21:10:17
tianliudut
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10楼2011-03-07 21:21:17