| 查看: 4402 | 回复: 26 | ||||
| 本帖产生 3 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | ||||
liuliancy铁杆木虫 (正式写手)
|
[求助]
离子交换层析（deae-纤维素）出峰差异很大（有图谱）
|
|||
|
昨天用DEAE-纤维素过柱子，图谱如1，目标蛋白跟杂蛋白差没分开，今天用相同的缓冲液相同的上样量和样品，结果却一点都没分开，柱子1*20，上样2ml，梯度洗脱液为50mL 20mmo/L pH7.5 Tris一乙酸缓冲液和50ml 50mmol/L pH5.0Tris一乙酸缓冲液(含0.3mol/L 氯化钠)，得到的图谱却是2和3的样子，请教各位长辈这是为什么？洗脱液要怎么调节才能将得到较好的洗脱效果？ 图1  图2  图3  [ 来自科研家族 生物医药家族 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
085700资源与环境308求调剂
已经有7人回复
-
265求调剂
已经有5人回复
-
279分求调剂 一志愿211
已经有3人回复
-
求调剂
已经有3人回复
-
一志愿吉林大学材料学硕321求调剂
已经有12人回复
-
286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！
已经有3人回复
-
329求调剂
已经有5人回复
-
申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复
已经有4人回复
-
材料学硕318求调剂
已经有5人回复
-
一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂
已经有6人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- GE Healthcare（Amersham） 离子交换层析手册 中文版
已经有189人回复
- 【资料】离子交换层析技术，非电子书
已经有69人回复
- 一种蛋白能先用阳离子交换层析再用阴离子交换层析吗
已经有6人回复
- 重金求助关于离子交换树脂层析柱分离中性多糖的操作，先行谢谢各位
已经有15人回复
- 【求助】离子交换树脂层析！
已经有4人回复
- 【求助/交流】离子交换层析怎么选择pH?
已经有4人回复
- 【求助/交流】离子交换层析
已经有4人回复
- 【求助】请问大家纯化分离多肽都用什么规格的离子交换层析
已经有7人回复
- 【求助】求助：离子交换层析达人--什么离子交换剂在层析过程中不会发生体积改变---
已经有5人回复
- 【求助/交流】离子交换层析
已经有10人回复
- 【求助】请问阳离子交换层析柱如何清洗
已经有11人回复
- 请教一下关于离子交换层析的问题
已经有5人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19455.4
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6586
- 在线: 2777.2小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★
adslye(金币+2, BioEPI+1): 鼓励经典~祝顺利！ 2011-08-18 09:20:19
liuliancy(金币+3): 感谢老大！！！ 2011-08-18 09:27:20
adslye(金币+2, BioEPI+1): 鼓励经典~祝顺利！ 2011-08-18 09:20:19
liuliancy(金币+3): 感谢老大！！！ 2011-08-18 09:27:20
|
1、我没听说过Tris-醋酸这个缓冲液，你有没有试过Tris-盐酸缓冲液？ 2、你的两个洗脱液用的是20mmo/L pH7.5 Tris一乙酸缓冲液和50ml 50mmol/L pH5.0Tris一乙酸缓冲液(含0.3mol/L 氯化钠)，看来你是想用pH梯度和离子强度一起来制造一个洗脱梯度，这样做有什么依据吗？我认为这样会引入误差，因为两个因素制造的梯度可控制性可能会弱于一个因素。如果用pH值，不知道稍低的pH值会不会引起蛋白质失活，所以我喜欢用离子强度作为洗脱梯度，起始缓冲液和洗脱缓冲液的pH值相同，但是氯化钠分别为0和1M，能制作出一条从0-1M的连续线性梯度。这样结果也更好分析。 3、两个峰即使是顶点能分开，但交叉很大也是不纯的。DEAE在我的实验里分离效果差，比不上其它的阴离子交换层析柱，如果有别的层析柱，也可以联用。 4、层析柱1*20没有意义，计算柱体积才有意义。 |
2楼2011-08-18 00:06:28
liuliancy
铁杆木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 7661.1
- 散金: 71
- 红花: 12
- 帖子: 346
- 在线: 333.4小时
- 虫号: 1088984
- 注册: 2010-09-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2011-08-18 09:35:05
alexlv
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 284.8
- 帖子: 55
- 在线: 6.5小时
- 虫号: 132917
- 注册: 2005-12-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2011-08-18 12:06:14
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19455.4
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6586
- 在线: 2777.2小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
5楼2011-08-19 00:47:10
btx362237729
金虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 927.7
- 散金: 74
- 红花: 3
- 帖子: 745
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1069351
- 注册: 2010-08-04
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
这个要学习一下 6楼2011-08-19 12:17:49
liuliancy
铁杆木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 7661.1
- 散金: 71
- 红花: 12
- 帖子: 346
- 在线: 333.4小时
- 虫号: 1088984
- 注册: 2010-09-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
|
做了下，分别用20mM tris-乙酸ph7.5和50mM tris-乙酸ph5.0（含NaCl 0.3M）、20mM tris-hcl ph7.5和20mM tris-hcl ph7.5（含NaCl 1M）、20mM tris-hcl ph7.8和20mM tris-hcl ph7.8（含NaCl 0.8M）、20mM tris-hcl ph7.2和20mM tris-hcl ph7.2（含NaCl 0.8M）图谱如下： 20mM tris-乙酸ph7.5和50mM tris-乙酸ph5.0（含NaCl 0.3M）  20mM tris-hcl ph7.5和20mM tris-hcl ph7.5（含NaCl 1M）  20mM tris-hcl ph7.8和20mM tris-hcl ph7.8（含NaCl 0.8M）  20mM tris-hcl ph7.2和20mM tris-hcl ph7.2（含NaCl 0.8M）  请指教！ |
7楼2011-08-19 20:32:19
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19455.4
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6586
- 在线: 2777.2小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
8楼2011-08-19 21:32:30
liuliancy
铁杆木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 7661.1
- 散金: 71
- 红花: 12
- 帖子: 346
- 在线: 333.4小时
- 虫号: 1088984
- 注册: 2010-09-04
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2011-08-19 21:55:34
10楼2011-08-20 00:21:13
10