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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】离子交换层析
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quinn

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】离子交换层析 已有3人参与

我在做蛋白纯化，是一种酸性蛋白，现在手上只有DEAE sephdex A50,请问这个胶能用酸性缓冲液吗？因为我做了预实验，pH在6以上，样品里几乎所有蛋白都挂在胶上了，没有意义了，我用醋酸缓冲液pH5.5的，可以样加上以后，根本洗不下来，用盐洗胶时胶还压缩了，不知道怎么回事，亲们，帮帮忙吧
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古之成大事者，不惟有超士之才，亦有坚忍不拔之志
1楼 2010-10-15 10:45:46
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gdxinlan

禁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-15 14:35:57
本帖内容被屏蔽
2楼2010-10-15 13:24:21
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biowandy

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~ 2010-10-15 16:27:21
引用回帖:
Originally posted by quinn at 2010-10-15 10:45:46:
我在做蛋白纯化，是一种酸性蛋白，现在手上只有DEAE sephdex A50,请问这个胶能用酸性缓冲液吗？因为我做了预实验，pH在6以上，样品里几乎所有蛋白都挂在胶上了，没有意义了，我用醋酸缓冲液pH5.5的，可以样加上以 ...

用酸洗是可以的，我用了4.7的。  但是你说的蛋白不下来，这个就不好说了。你加高盐离子浓度到2M或者5M试试，如果还是不下来，  你就要看看你的这个蛋白是不是又问题？  电泳看看。

有些杂质像蛋白，但是挂柱子后很难下来。
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3楼2010-10-15 16:16:30
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quinn

铁虫 (初入文坛)
★
silicare(金币+1):谢谢分享 2010-10-18 12:05:13
引用回帖:
Originally posted by biowandy at 2010-10-15 16:16:30:



用酸洗是可以的，我用了4.7的。  但是你说的蛋白不下来，这个就不好说了。你加高盐离子浓度到2M或者5M试试，如果还是不下来，  你就要看看你的这个蛋白是不是又问题？  电泳看看。

有些杂质像蛋白，但是 ...

我用试管做的预实验，很好，能挂上，用盐也能洗下来，可是上柱后就不一样了，样加上后好像都堵在上层了，洗不下来，不知道为什么，可能是样品里含有色素
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古之成大事者，不惟有超士之才，亦有坚忍不拔之志
4楼2010-10-16 23:04:39
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biowandy

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢分享 2010-10-18 12:05:21
引用回帖:
Originally posted by quinn at 2010-10-16 23:04:39:


我用试管做的预实验，很好，能挂上，用盐也能洗下来，可是上柱后就不一样了，样加上后好像都堵在上层了，洗不下来，不知道为什么，可能是样品里含有色素

说的很对， 有些色素有影响，第一色素在280有吸收值，但是不是蛋白，

第二，色素有时候上去了，就不下来，我也遇见过，怎么搞逗不下来，
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5楼2010-10-18 08:57:24
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