应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 离子交换层析求助
131/2返回列表12下一页
查看: 2296  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Biochemical

铜虫 (初入文坛)

[求助] 离子交换层析求助

酯酶的分离纯化，酯酶来源于摩式摩根菌，采用的是传统的纯化策略。目前遇到了一个比较棘手的问题就是过柱子的时候挂不上去，阴离子DEAE,HIGH Q，缓冲液是TIS-HCI pH=8.5，结果都是活力大部分都在穿透峰。阳离子的是CM，缓冲液醋酸和醋酸钠pH=5.4，结果也是一样，活力也大部分在穿透。疏水柱：丁基 用了2M硫酸铵，也没有结合。
回复此楼

» 本帖@通知

@silicare @看天

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-14 15:27:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liudt1105

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个一般是不知道等电点才发生的情况。。。。如果真是等电点不知道，建议你按照三楼说的试试摸索一下。
赞一下(1人) 回复此楼
安琪酵母浸粉、蛋白胨，您实验的好助手
5楼2012-03-14 23:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的发酵液是怎么处理的？是否有高离子强度？
我看到你说大部分透过，意思应该有部分结合
我以为有两种情况：过载或离子强度太大，建议上离子交换柱前先透析。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-03-15 05:56:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

果断悉尼

铁杆木虫 (知名作家)

三沙市名誉常务副市长

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流！ 2012-03-14 18:12:38
非专业人士给点建议
1、可否考虑改变上样缓冲液的PH
2、可否考虑把穿透处理下 再去过一次柱子 这个时候或许竞争结合的杂质少了 目的蛋白的结合活性就强了
3、上样的样品可否处理下 比如盐析 除去大部分的其他杂蛋白等
赞一下 回复此楼
我的微信号happyjk5208，谢绝闲聊
2楼2012-03-14 15:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jianqiangsui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你要分离的目的蛋白等电点是多少？在不知道等电点的情况下，建议你先用强阴或强阳离子交换剂探索纯化条件，先改变洗脱液的pH，洗脱液的浓度应尽量小
赞一下 回复此楼
学海无涯
3楼2012-03-14 17:02:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用离子交换，一个非常重要的因素就是你一定要知道目标蛋白的等电点，要不你摸索条件很困难的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-14 22:38:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议用硫铵分级沉淀后透析在上阴离子，不知道在过柱子时是否电导发生很大变化？柱子是自装还是预装，最好再生一下用。可能柱效不行了。阴离子缓冲液可以50mM TIS-HCI pH=7.2上个强阴离子柱先试一下，再过凝胶柱。
祝你好运。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-15 08:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐菲鱼

金虫 (著名写手)
学习 也在用柱
回复此楼
8楼2012-03-15 09:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Biochemical

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 果断悉尼 at 2012-03-14 15:44:44:
非专业人士给点建议
1、可否考虑改变上样缓冲液的PH
2、可否考虑把穿透处理下 再去过一次柱子 这个时候或许竞争结合的杂质少了 目的蛋白的结合活性就强了
3、上样的样品可否处理下 比如盐析 除去大部分的其他杂 ...

谢谢啊
回复此楼
9楼2012-03-15 10:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Biochemical

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by jianqiangsui at 2012-03-14 17:02:43:
不知道你要分离的目的蛋白等电点是多少？在不知道等电点的情况下，建议你先用强阴或强阳离子交换剂探索纯化条件，先改变洗脱液的pH，洗脱液的浓度应尽量小

嗯 ，目前蛋白的等电点还不知道，阳离子也试过一次是CM柱，用的缓存液是pH=5.4的，目前想再降低缓冲液的pH，再试试
赞一下 回复此楼
10楼2012-03-15 10:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Biochemical 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +7 秋有木北 2026-03-14 7/350 2026-03-15 17:30 by 小物理化学
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 328，0703考生求调剂，一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 纺织、生物、化学、材料相关专业招生了 +4 耶耶业 2026-03-09 7/350 2026-03-12 19:05 by Equinoxhua
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭