应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 离子交换层析求助
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 2339  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Biochemical

铜虫 (初入文坛)

[求助] 离子交换层析求助

酯酶的分离纯化，酯酶来源于摩式摩根菌，采用的是传统的纯化策略。目前遇到了一个比较棘手的问题就是过柱子的时候挂不上去，阴离子DEAE,HIGH Q，缓冲液是TIS-HCI pH=8.5，结果都是活力大部分都在穿透峰。阳离子的是CM，缓冲液醋酸和醋酸钠pH=5.4，结果也是一样，活力也大部分在穿透。疏水柱：丁基 用了2M硫酸铵，也没有结合。
回复此楼

» 本帖@通知

@silicare @看天

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-14 15:27:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liudt1105

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个一般是不知道等电点才发生的情况。。。。如果真是等电点不知道，建议你按照三楼说的试试摸索一下。
赞一下(1人) 回复此楼
安琪酵母浸粉、蛋白胨，您实验的好助手
5楼2012-03-14 23:52:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的发酵液是怎么处理的？是否有高离子强度？
我看到你说大部分透过，意思应该有部分结合
我以为有两种情况：过载或离子强度太大，建议上离子交换柱前先透析。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-03-15 05:56:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

果断悉尼

铁杆木虫 (知名作家)

三沙市名誉常务副市长

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流！ 2012-03-14 18:12:38
非专业人士给点建议
1、可否考虑改变上样缓冲液的PH
2、可否考虑把穿透处理下 再去过一次柱子 这个时候或许竞争结合的杂质少了 目的蛋白的结合活性就强了
3、上样的样品可否处理下 比如盐析 除去大部分的其他杂蛋白等
赞一下 回复此楼
我的微信号happyjk5208，谢绝闲聊
2楼2012-03-14 15:44:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jianqiangsui

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不知道你要分离的目的蛋白等电点是多少？在不知道等电点的情况下，建议你先用强阴或强阳离子交换剂探索纯化条件，先改变洗脱液的pH，洗脱液的浓度应尽量小
赞一下 回复此楼
学海无涯
3楼2012-03-14 17:02:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用离子交换，一个非常重要的因素就是你一定要知道目标蛋白的等电点，要不你摸索条件很困难的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-14 22:38:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议用硫铵分级沉淀后透析在上阴离子，不知道在过柱子时是否电导发生很大变化？柱子是自装还是预装，最好再生一下用。可能柱效不行了。阴离子缓冲液可以50mM TIS-HCI pH=7.2上个强阴离子柱先试一下，再过凝胶柱。
祝你好运。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-15 08:52:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

乐菲鱼

金虫 (著名写手)
学习 也在用柱
回复此楼
8楼2012-03-15 09:12:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Biochemical

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 果断悉尼 at 2012-03-14 15:44:44:
非专业人士给点建议
1、可否考虑改变上样缓冲液的PH
2、可否考虑把穿透处理下 再去过一次柱子 这个时候或许竞争结合的杂质少了 目的蛋白的结合活性就强了
3、上样的样品可否处理下 比如盐析 除去大部分的其他杂 ...

谢谢啊
回复此楼
9楼2012-03-15 10:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Biochemical

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by jianqiangsui at 2012-03-14 17:02:43:
不知道你要分离的目的蛋白等电点是多少？在不知道等电点的情况下，建议你先用强阴或强阳离子交换剂探索纯化条件，先改变洗脱液的pH，洗脱液的浓度应尽量小

嗯 ，目前蛋白的等电点还不知道，阳离子也试过一次是CM柱，用的缓存液是pH=5.4的，目前想再降低缓冲液的pH，再试试
赞一下 回复此楼
10楼2012-03-15 10:53:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Biochemical 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工306分找调剂 +12 沧海轻舟e 2026-04-03 13/650 2026-04-04 23:45 by lqwchd
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +4 zyx上岸！ 2026-04-04 4/200 2026-04-04 23:28 by wxiongid
[考研] 278求调剂 +3 依旧！ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 340求调剂 +4 jhx777 2026-03-29 4/200 2026-04-04 20:08 by 无际的草原
[考研] 考研调剂 +4 美丽的youth_ 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:16 by imissbao
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 325求调剂 +4 春风不借意 2026-04-04 4/200 2026-04-04 14:46 by 湘农储能材料
[考研] 22408求调剂 354分 可跨专业 +3 hannnnnnn 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:35 by 土木硕士招生
[考研] 数二英二348求调剂 +4 hxdzj1 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:25 by zhq0425
[考研] 考研调剂 +3 Draa 2026-04-03 3/150 2026-04-03 17:37 by hgwz7468
[考研] 266分，求材料相关专业调剂 +13 哇呼哼呼哼 2026-03-30 15/750 2026-04-03 15:24 by arrow8852
[考研] 0703化学 +7 goldtt 2026-04-02 9/450 2026-04-03 09:36 by 蓝云思雨
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
[考研] 化学070300-总分378-求调剂 +5 挪椅子的泡泡糖 2026-04-02 5/250 2026-04-02 22:20 by ZXlzxl0425
[考研] 交通运输考试264分求工科调剂 +4 jike777 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:53 by zllcz
[考研] 377求调剂 +3 RASKIN 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:45 by zzchen2000
[考研] 一志愿安徽大学计算机科学与技术学硕，331分求调剂 +5 蒋昌鹏qtj 2026-04-01 5/250 2026-04-02 08:10 by fxue1114
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 318求调剂 +8 七忆77 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:37 by Jaylen.
[考研] 一志愿大连理工大学材料求调剂 +6 Gymno 2026-03-30 6/300 2026-03-31 07:26 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭