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Biochemical

铜虫 (初入文坛)

[求助] 离子交换层析求助

酯酶的分离纯化,酯酶来源于摩式摩根菌,采用的是传统的纯化策略。目前遇到了一个比较棘手的问题就是过柱子的时候挂不上去,阴离子DEAE,HIGH Q,缓冲液是TIS-HCI pH=8.5,结果都是活力大部分都在穿透峰。阳离子的是CM,缓冲液醋酸和醋酸钠pH=5.4,结果也是一样,活力也大部分在穿透。疏水柱:丁基 用了2M硫酸铵,也没有结合。
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议用硫铵分级沉淀后透析在上阴离子,不知道在过柱子时是否电导发生很大变化?柱子是自装还是预装,最好再生一下用。可能柱效不行了。阴离子缓冲液可以50mM TIS-HCI pH=7.2上个强阴离子柱先试一下,再过凝胶柱。
祝你好运。
7楼2012-03-15 08:52:13
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