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银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化已有12人参与

各位大侠：

我做的蛋白等电点是4.3，用PH=7.4的PBS缓冲液作为A液来平衡柱子，该缓冲液不含NaCl，结果出乎意料的是我的蛋白质竟然不能结合到柱子上去，而直接从柱子里穿透出来，这是为什么呢？

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使用DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析纯化蛋白后杂蛋白的洗脱已经有7人回复
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1楼 2011-03-07 14:42:59

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rhy1027

金虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 19:53:53

首先纠正你一个说法，PBS中的S就是sodium的缩写，也就是说你的buffer是PB（即磷酸缓冲液）不是PBS。
你蛋白的等电点是预测出来的吧，一般来说，预测出来的等电点跟实际值相差不会超过1，但你所描述的情况我也遇到过，换做是我的话，就会直接改变纯化方案了，用阴离子柱反穿后，再做阳离子交换试试，当然这中间一定要彻底脱盐了！但你别指望非特异性吸附柱子会给你多纯的东西，后面的步骤就要“因地制宜”了！根据你目的产物的特性，进一步确立纯化方案！多查查文献吧！

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