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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化
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wqf@126.com

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化 已有12人参与

各位大侠：
      
        我做的蛋白等电点是4.3，用PH=7.4的PBS缓冲液作为A液来平衡柱子，该缓冲液不含NaCl，结果出乎意料的是我的蛋白质竟然不能结合到柱子上去，而直接从柱子里穿透出来，这是为什么呢？
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1楼 2011-03-07 14:42:59
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lcy1971

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励新虫 2011-03-07 19:54:02
离子交换低盐上样，没有氯化钠不影响。
是不是柱子有问题？也许介质没处理好。找个阳性对照吧。
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4楼2011-03-07 16:38:05
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的蛋白对NaCl敏感么？ 离子强度不够，蛋白挂不上去吧？
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2楼2011-03-07 15:52:10
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wqf@126.com

银虫 (正式写手)
应该不是因为这个原因，在做离子交换之前我加热处理了我的蛋白，不知道加热对它会不会有影响？
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3楼2011-03-07 16:13:53
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-07 19:53:43
加热是否对目标蛋白质有影响，怎么上柱前不测定？最好每一步都有蛋白质总量和目标蛋白质总量和活性的数据，不然出了问题也不知道在哪里出，或者出了问题还不能及时发现。

阴离子交换层析需要低盐吸附，高盐洗脱，所以平衡液和蛋白质样品的离子浓度都不能高。你的目标蛋白质等电点在4.3，平衡液的pH值为7.4，产生的电荷差距足够吸附有余了，所以不能吸附的原因是蛋白质早就失去活性，怎么测都测不到，或者平衡液和蛋白质样品离子浓度过高，样品没能被吸附就被洗脱。注意过电导率cond%吗？

无图无真相，如果是用AKTA的，把图截下来发上来。如果是用自动收集仪的，就尽量获得离子强度的测定方法，弄个电导仪。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-03-07 16:41:24
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