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wqf@126.com

银虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】蛋白质的阴离子交换纯化已有12人参与

各位大侠：

我做的蛋白等电点是4.3，用PH=7.4的PBS缓冲液作为A液来平衡柱子，该缓冲液不含NaCl，结果出乎意料的是我的蛋白质竟然不能结合到柱子上去，而直接从柱子里穿透出来，这是为什么呢？

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1楼 2011-03-07 14:42:59

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tianliudut

银虫 (初入文坛)

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加热蛋白会不会变性？变性后等电点可能会有变化。

阴离子交换不宜用磷酸盐缓冲液。

再有就是要具体问题具体分析，你说的不清楚，不确定因素太多了。

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10楼2011-03-07 21:21:17

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微笑漩涡

新虫 (著名写手)

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你的蛋白对NaCl敏感么？离子强度不够，蛋白挂不上去吧？

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2楼2011-03-07 15:52:10

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wqf@126.com

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应该不是因为这个原因，在做离子交换之前我加热处理了我的蛋白，不知道加热对它会不会有影响？

3楼2011-03-07 16:13:53

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lcy1971

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rainwander(金币+2): 鼓励新虫 2011-03-07 19:54:02

离子交换低盐上样，没有氯化钠不影响。
是不是柱子有问题？也许介质没处理好。找个阳性对照吧。

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4楼2011-03-07 16:38:05

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