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泡泡9706

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】原核表达蛋白纯化已有15人参与

在大肠杆菌BL21中表达了一个酶，产生包涵体，优化后可以产生有活性的该酶。镍柱纯化时在目的条带附近总伴随有另一条带（或者多条），用了离子交换除不去，而且也不知道哪条是我的目的条带。有图

请高人指教有何办法将其分纯？
另外：包涵体蛋白和胞内上清中的目的蛋白跑SDS-PAGE时，条带一定在同一位置出现吗？

[ Last edited by 泡泡9706 on 2010-6-13 at 11:13 ]

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1楼2010-06-12 17:02:35

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黑罕

金虫 (小有名气)

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reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:11
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-06-15 07:48:57
泡泡9706(金币+1):做了western，用的his标签的抗体，都能染出来……据说国产的抗体特异性不好…… 2010-06-17 17:04:28

做wester blot 鉴定出你的条带，如果还不行就只能做质谱了